基本信息
产品名称 | Endonuclease IV | 货号 | P-PR1364 |
规格 | 1000U、5000U | 用途 | 仅供科研 |
英文名称：Endonuclease IV
作用机制：一种DNA内切酶，可特异性切割DNA链上的AP位点（无嘌呤或无嘧啶位点），同时具有3'磷酸酶活性，可去除DNA链3'末端的磷酸基团，参与DNA损伤修复过程。
适用样本：含有AP位点的DNA样本，可用于DNA损伤修复机制研究、DNA修饰分析等实验。
产品概述
该酶是一种DNA损伤修复相关的核酸内切酶，主要功能是切割DNA双链上的AP位点（无嘌呤/无嘧啶位点），也可氧化损伤的嘧啶碱基位点进行切割。它在DNA碱基切除修复通路中发挥关键作用，能识别并处理多种DNA损伤，为研究DNA损伤与修复机制、筛选DNA修复相关药物等提供重要工具，也可用于体外构建特定的DNA损伤模型。
产品特点
AP位点特异性：专门识别并切割DNA上的无嘌呤/无嘧啶位点
损伤修复研究：是研究碱基切除修复通路的关键工具酶
低序列偏好性：对AP位点周围的碱基序列无明显选择性
热稳定性：37℃孵育1小时后仍保留90%以上活性
操作步骤
一、试剂预处理
取出洗涤液Ⅰ和洗涤液Ⅱ浓缩液，按试剂瓶标注比例加入无水乙醇，充分混匀后备用
将洗脱液置于65℃水浴锅中预热
二、水样处理与核酸富集
取10mL预处理后的水样（杂质较多的水样需先经0.45μm滤膜过滤）加入50mL洁净烧杯
依次加入0.5mL核酸富集因子、5mL病毒裂解液及50μL消化液，充分搅拌混匀
将烧杯置于65℃水浴中孵育15分钟，期间每隔5分钟搅拌一次
三、核酸纯化与洗脱
向烧杯中加入15mL异丙醇，充分搅拌混匀后，将混合液转移至连接富集吸附柱的50mL注射器针筒内
静置2分钟后，开启真空抽滤装置，将液体缓慢抽滤至富集吸附柱内（注意不要抽干）
向针筒内加入5mL洗涤液Ⅰ，静置2分钟后抽滤；再加入5mL洗涤液Ⅱ，静置2分钟后抽滤，重复洗涤液Ⅱ步骤1次
取下富集吸附柱，放入收集管中，12000rpm常温离心3分钟，去除残留洗涤液
将吸附柱转移至新的收集管，加入50-100μL预热的洗脱液，静置2分钟后12000rpm离心2分钟
收集管中的液体即为纯化后的病毒核酸，可直接用于下游实验或-70℃保存
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注意事项
试剂保存：试剂盒应避光保存于2-8℃，有效期12个月；核酸富集因子避免反复冻融，使用后立即放回冰箱
水样预处理：高浊度或杂质过多的水样，需先经0.45μm滤膜过滤，避免堵塞吸附柱
操作规范：实验全程佩戴手套、口罩、护目镜等防护用品，避免直接接触水样与试剂；若不慎接触皮肤或眼睛，立即用大量清水冲洗
试剂配制：洗涤液需现用现配，按比例加入无水乙醇后充分混匀，未使用的稀释液可在2-8℃保存1个月
核酸保存：提取的核酸若长期保存，需置于-70℃环境，避免反复冻融；短期可在4℃保存24小时
器材要求：所有实验器材需为无RNA酶耗材，实验前可经180℃干烤6小时或用RNA酶清除剂处理
关键字： Endonuclease IV;
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