热敏双链DNA特异性核酸酶(HL dsDNase)

基本信息‌

‌英文名称‌：Thermolabile Double-Strand DNA Specific Nuclease (HL dsDNase)
作用机制：一种热敏型双链DNA特异性核酸酶，在常温下可特异性降解双链DNA，对单链DNA、RNA或RNA-DNA杂合链无作用，在高温下（如65℃）会快速失活，可用于去除样本中的双链DNA污染。 

适用样本：含有双链DNA污染的RNA样本、蛋白样本等，可用于RNA纯化、蛋白纯化等实验，尤其适合对热敏感的样本处理。
产品概述
这是一种具有热敏特性的双链DNA特异性核酸酶，能够在适宜温度下特异性降解双链DNA，而对单链DNA、RNA和蛋白质无作用，且在高温条件下可迅速失活。它可用于去除RNA样品中的双链DNA污染、构建DNA文库时去除多余的双链DNA片段等实验，热敏特性使其在实验中易于控制反应的进行与终止，提升实验的灵活性。
产品特点
双链特异性：仅降解双链DNA，对单链DNA和RNA无活性

热敏可逆性：低温下保持活性，高温（65℃以上）快速失活

模板清除工具：用于去除RNA样品中的双链DNA污染，提高RNA纯度

反应条件温和：最适温度37℃，反应时间可灵活控制
核心PCR试剂及使用方法

1. Taq DNA聚合酶

作用：催化DNA链的延伸，是PCR反应的核心酶

使用方法：

通常按0.5-2U/25μL体系添加，具体用量参照试剂说明书

酶对温度敏感，需在冰上操作，避免反复冻融

最后加入酶液，防止提前激活导致非特异性扩增

2. dNTP混合液

作用：提供DNA合成的原料（dATP、dTTP、dCTP、dGTP）

使用方法：

终浓度一般为200μmol/L每种dNTP，总浓度800μmol/L

避免反复冻融，可分装成小体积储存

注意pH值，过酸或过碱会抑制聚合酶活性

3. PCR缓冲液

作用：提供酶促反应的适宜环境（pH、离子浓度）

使用方法：

通常为10×浓度，使用时稀释至1×终浓度

含Mg²+的缓冲液需注意Mg²+浓度，一般1.5-2.5mmol/L为最优范围

部分缓冲液含KCl、Tris-HCl等成分，无需额外添加

4. 引物（上游/下游）

作用：定位扩增区域，引导DNA合成起始

使用方法：

终浓度一般为0.1-1μmol/L，根据引物Tm值调整

引物需用TE缓冲液或无菌水溶解，浓度计算准确

避免引物降解，-20℃分装储存，避免反复冻融

5. 模板DNA

作用：提供扩增的原始DNA模板

使用方法：

模板浓度一般为1ng-1μg/25μL体系，根据模板类型调整

基因组DNA需充分纯化，避免蛋白、RNA等杂质污染

质粒DNA可适当减少用量，一般10-100ng即可

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实验流程

反应体系配制：按1×工作浓度混合预混液、模板（10-100 ng）、引物（0.2-0.5 μM）及无核酸酶水。

PCR程序：

预变性：95℃ 30 sec

扩增循环（40×）：95℃ 5 sec → 60℃ 30 sec（荧光采集）

熔解曲线分析：60-95℃梯度升温。

注意事项

避免反复冻融，推荐分装保存。

熔解曲线需呈现单一峰以确保扩增特异性。

若需绝对定量，建议配套标准品使用。