基本信息
产品名称 | 大肠杆菌蛋白提取液 | 货号 | P-PR1334 |
规格 | 100ml | 用途 | 仅供科研 |
英文名称：E. coli Protein Extraction Solution
作用机制：含有裂解酶、去污剂等成分，可高效裂解大肠杆菌细胞，释放细胞内的蛋白质，同时抑制蛋白酶的活性，保护蛋白质不被降解，用于大肠杆菌表达的重组蛋白的提取。
适用样本：专门用于大肠杆菌细胞的蛋白质提取，适用于重组蛋白表达、蛋白质组学分析等实验。
产品概述
大肠杆菌蛋白提取液是专门用于从大肠杆菌中提取重组蛋白或天然蛋白的试剂。它通常包含裂解缓冲液、溶菌酶、蛋白酶抑制剂等组分，能通过化学与酶学方法快速裂解大肠杆菌细胞壁，释放胞内蛋白。该提取液可根据不同的蛋白表达形式（可溶性表达或包涵体表达）进行优化，既能高效提取可溶性蛋白，也能处理包涵体蛋白并辅助其复性。提取过程中，蛋白酶抑制剂可有效抑制大肠杆菌内源性蛋白酶对目的蛋白的降解，最大程度保证目的蛋白的完整性与活性。提取后的蛋白样品可直接用于蛋白纯化、活性分析、Western Blot等后续实验，是大肠杆菌蛋白表达研究中的常用试剂。
产品特点
双重裂解机制：结合化学裂解与酶学裂解（溶菌酶），快速破坏大肠杆菌细胞壁，释放胞内蛋白。
分类型提取：提供可溶性蛋白提取与包涵体蛋白提取两种方案，适配不同表达形式的重组蛋白。
蛋白保护：内置蛋白酶抑制剂，有效抑制大肠杆菌内源性蛋白酶对目的蛋白的降解。
直接下游应用：提取的蛋白可直接用于Western Blot、蛋白纯化、活性分析等实验，无需额外处理。
操作步骤
一、试剂预处理
取出洗涤液Ⅰ和洗涤液Ⅱ浓缩液，按试剂瓶标注比例加入无水乙醇，充分混匀后备用
将洗脱液置于65℃水浴锅中预热
二、水样处理与核酸富集
取10mL预处理后的水样（杂质较多的水样需先经0.45μm滤膜过滤）加入50mL洁净烧杯
依次加入0.5mL核酸富集因子、5mL病毒裂解液及50μL消化液，充分搅拌混匀
将烧杯置于65℃水浴中孵育15分钟，期间每隔5分钟搅拌一次
三、核酸纯化与洗脱
向烧杯中加入15mL异丙醇，充分搅拌混匀后，将混合液转移至连接富集吸附柱的50mL注射器针筒内
静置2分钟后，开启真空抽滤装置，将液体缓慢抽滤至富集吸附柱内（注意不要抽干）
向针筒内加入5mL洗涤液Ⅰ，静置2分钟后抽滤；再加入5mL洗涤液Ⅱ，静置2分钟后抽滤，重复洗涤液Ⅱ步骤1次
取下富集吸附柱，放入收集管中，12000rpm常温离心3分钟，去除残留洗涤液
将吸附柱转移至新的收集管，加入50-100μL预热的洗脱液，静置2分钟后12000rpm离心2分钟
收集管中的液体即为纯化后的病毒核酸，可直接用于下游实验或-70℃保存
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注意事项
试剂保存：试剂盒应避光保存于2-8℃，有效期12个月；核酸富集因子避免反复冻融，使用后立即放回冰箱
水样预处理：高浊度或杂质过多的水样，需先经0.45μm滤膜过滤，避免堵塞吸附柱
操作规范：实验全程佩戴手套、口罩、护目镜等防护用品，避免直接接触水样与试剂；若不慎接触皮肤或眼睛，立即用大量清水冲洗
试剂配制：洗涤液需现用现配，按比例加入无水乙醇后充分混匀，未使用的稀释液可在2-8℃保存1个月
核酸保存：提取的核酸若长期保存，需置于-70℃环境，避免反复冻融；短期可在4℃保存24小时
器材要求：所有实验器材需为无RNA酶耗材，实验前可经180℃干烤6小时或用RNA酶清除剂处理
关键字： 大肠杆菌蛋白提取液;E. coli Protein Extr;
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