预染发光Western Marker

基本信息‌

‌英文名称‌：Pre-stained Fluorescent Western Marker
作用机制：含有预先标记了荧光或发光基团的蛋白质分子，分子量范围覆盖常用的蛋白质分子量区间。在Western blotting实验中，可作为分子量标准，同时可直接观察电泳和转膜过程，判断蛋白质的迁移和转膜效率。

适用样本：适用于Western blotting实验，可与各种生物样本的蛋白质电泳配合使用，用于判断目标蛋白的分子量和电泳转膜效果。
产品概述
预染发光Western Marker是一种用于Western Blot实验的蛋白分子量标准品，兼具预染与发光双重特性。它由一系列已知分子量的纯化蛋白组成，且这些蛋白预先进行了荧光染色，在SDS-PAGE电泳过程中即可直接观察到蛋白条带的迁移情况，便于实时监测电泳进程与分离效果。同时，该Marker中的蛋白还可被HRP标记的二抗识别（或自身携带发光标记），在Western Blot显影时能与目的蛋白条带一起发光显影，无需额外染色步骤即可同时确定目的蛋白的分子量与位置。预染发光Western Marker分子量范围覆盖广（通常从10kDa至250kDa不等），条带清晰、亮度均匀，为Western Blot实验中蛋白分子量的准确判定提供了便捷可靠的工具。
产品特点
双重功能特性：同时具备预染示踪与发光检测功能，电泳过程中实时监测分离效果，显影时直接显示分子量。

宽分子量范围：覆盖10kDa-250kDa，包含10-15条清晰条带，适配绝大多数蛋白分子量判定。

条带均匀清晰：各条带亮度均匀，无强弱差异，便于准确比对目的蛋白分子量。

兼容性强：适配SDS-PAGE电泳与Western Blot全流程，兼容PVDF膜与NC膜。
实验前准备

试剂与耗材检查：确认PCR预混液、上下游引物、模板DNA、无酶水等试剂在有效期内，外观无浑浊、沉淀；PCR管、枪头需为无酶无菌规格。

仪器预热：提前10-15分钟启动PCR仪，设置好反应程序，确保仪器达到预设温度。

环境准备：在超净工作台内操作，佩戴无粉手套，避免交叉污染；操作前用75%酒精擦拭台面和移液器。

反应体系配制

冰上操作：将所有试剂放置于冰盒内，避免酶失活。

体系配比（以25μL体系为例）：

PCR预混液（含Taq酶、dNTP、Buffer）：12.5μL

上游引物（10μM）：1μL

下游引物（10μM）：1μL

模板DNA：1-5μL（根据模板浓度调整）

无酶水：补足至25μL

轻柔混匀：用移液器轻轻吹吸混合液3-5次，避免产生气泡；若有气泡可短暂离心去除。

分装体系：将配制好的反应液分装至PCR管中，每管25μL，盖紧管盖。

PCR仪上机反应

程序设置：根据引物Tm值和实验需求设置三步法或两步法程序：

预变性：95℃，3-5分钟

循环阶段：95℃变性30秒，55-65℃退火30秒，72℃延伸（根据片段长度调整，1kb约1分钟），循环25-35次

终延伸：72℃，5-10分钟

保温：4℃。

上机运行：将PCR管放入PCR仪样品槽，确保管盖紧密贴合；启动程序，等待反应完成。

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注意事项

无菌操作：所有试剂和耗材需高压灭菌或无菌处理，避免外源DNA污染

温度控制：酶、dNTP等试剂需-20℃储存，避免反复冻融

体系优化：根据引物Tm值、模板类型调整Mg²+浓度和退火温度

对照设置：每次实验需设置阴性对照（无模板）和阳性对照（已知阳性模板）