基本信息
产品名称 | EasyMut gene multisite mutagenesis kit（多点突变试剂盒） | 货号 | P-PR1236 |
规格 | 20次 | 用途 | 仅供科研 |
英文名称：EasyMut Gene Multisite Mutagenesis Kit
作用机制：通过设计特殊的引物，在PCR扩增过程中引入多个位点的突变，然后利用Dpn I酶降解野生型质粒模板，将含有突变的PCR产物转化到感受态细胞中，实现多点突变的高效构建。
适用样本：适用于对质粒DNA进行多点突变的实验，如蛋白质结构与功能研究、酶活性改造等，样本为野生型质粒DNA。
产品概述
EasyMut基因多点突变试剂盒是一套用于在目的基因或载体上快速引入多个位点突变的分子生物学试剂盒。它基于PCR诱变原理，通过设计包含突变位点的特异性引物，利用高保真DNA聚合酶进行PCR扩增，直接在目的DNA片段上引入多个碱基的替换、插入或缺失突变。试剂盒通常包含高保真PCR酶、突变缓冲液、dNTPs、阳性对照等组分，优化的反应体系与程序可高效实现多点突变，无需进行多次单突变叠加操作，大幅缩短了实验周期。该试剂盒操作简便，仅需一次PCR反应即可完成多个位点的突变，且突变效率高、特异性强，可用于基因功能研究、蛋白结构改造、载体优化等多种需要引入多点突变的实验场景，为基因的定向改造提供了便捷高效的工具。
产品特点
高效多点突变：一次PCR反应即可实现1-5个位点同时突变，无需多次单突变叠加，实验周期缩短50%。
高突变效率：突变效率≥90%，阳性克隆率高，减少筛选工作量。
操作简便：仅需设计包含突变位点的引物，无需酶切与连接，PCR后直接转化。
广谱兼容性：适用于各类质粒载体，插入片段长度不受限，适配不同基因改造需求。
操作步骤
样本处理：向1.5ml EP管中加入600μl miRNA提取试剂，再加入500μl血清或血浆样本，漩涡振荡30秒充分混匀
初步分离：13000rpm离心5分钟，将上清约1ml转移至新的2ml EP管中，加入1ml异丙醇，上下颠倒混合均匀
柱式吸附：将混合液分三次加入吸附柱（每次约700μl），13000rpm离心15秒，倒掉过柱液
洗涤纯化：
向吸附柱中加入700μl 75%异丙醇，13000rpm离心15秒，倒掉过滤液
向吸附柱中加入500μl无水乙醇，13000rpm离心15秒，倒掉过滤液
干燥柱体：吸附柱13000rpm空离心2分钟，去除残留乙醇，室温放置2分钟使乙醇完全挥发
RNA洗脱：在吸附柱滤芯中央加入30μl RNase-Free TE缓冲液，室温静置2分钟，13000rpm离心2分钟，收集滤液即为提取的miRNA产物
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注意事项
样本处理：
血浆抗凝剂建议使用EDTA或柠檬酸钠，避免使用肝素（会抑制PCR检测）
样本应避免反复冻融，新鲜样本建议尽快处理
试剂使用：
miRNA提取试剂含有胍盐，具有强烈腐蚀性，操作时需佩戴防护眼镜、手套和口罩
自备试剂需确保无RNase污染，避免影响RNA完整性
实验操作：
所有操作需在无RNase环境中进行，使用RNase-Free的枪头和离心管
离心过程需确保离心管盖紧，避免液体渗漏
产物检测：
由于血清/血浆中miRNA含量极低，提取产物浓度通常在5ng/μl以下，难以用常规NanoDrop测量，建议直接取10μl进行下游反转录实验
为获得更可靠数据，推荐使用特异性和灵敏度更好的TaqMan探针法进行miRNA定量检测
产物保存：提取的miRNA产物可立即用于下游实验，或分装后置于-80℃长期保存，避免反复冻融
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