Recombinant Human 4EBP1
商品介绍：
A-01K99599-50μg | Recombinant Human 4EBP1 |
A-01K99599-200ug | Recombinant Human 4EBP1 |
A-01K99599-1mg | Recombinant Human 4EBP1 |
别称：4E BP1, 4EBP1, BP 1, eIF4E binding protein 1, EIF4EBP1, PHAS I
标签：Western Blot，ELISA
种属：Human
宿主：E.Coli
表达区间：1-118aa
分子量：14.4 KDa
应用：Western Blot, ELISA
性状：Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4
纯度：Greater than 95% as determined by SDS-PAGE
溶解方法:Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex
存储:-20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution
商品概述：
4EBP1（真核翻译起始因子4E结合蛋白1）是细胞内调控蛋白质合成的关键蛋白之一。它通过与翻译起始因子eIF4E结合来抑制帽依赖性翻译的起始，从而负向调控蛋白质的合成过程。这一过程受到mTORC1信号通路的精密调控：当4EBP1被磷酸化后，便会与eIF4E解离，从而解除对翻译的抑制。该蛋白在细胞生长、增殖以及肿瘤发生等生理和病理过程中扮演着重要角色。
重组蛋白的制备流程：
重组蛋白的制备流程主要包括以下几个关键步骤：
1.基因获取：从生物体中提取目的基因，可通过PCR技术扩增特定DNA片段，也可以人工合成基因序列，确保所获取的基因能编码目标重组蛋白。
2.载体构建：将获取的目的基因与合适的载体连接，常见载体有质粒、噬菌体等。载体需具备复制原点、筛选标记等元件，使目的基因能在宿主细胞中稳定复制和表达。
3.宿主细胞转化：把构建好的重组载体导入宿主细胞，如大肠杆菌、酵母细胞或哺乳动物细胞等。转化方法有化学转化法、电穿孔法等。
4.筛选与鉴定：运用抗生素筛选、PCR鉴定、测序等方法，挑选出含有重组载体的阳性克隆细胞。
5.蛋白表达：优化培养条件，诱导阳性克隆细胞表达重组蛋白。根据宿主细胞类型和蛋白特性，调整温度、诱导剂浓度等参数。
6.蛋白纯化：采用亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤等方法，从细胞裂解液或培养液中分离纯化重组蛋白。
7.质量检测：对纯化后的重组蛋白进行纯度、活性、分子量等检测，确保其符合质量要求。
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收到产品后的处理：
离心收集：重组蛋白通常以冻干粉形式提供。在运输过程中，粉末可能会粘附在管壁或管盖上。因此，在开盖前，务必先进行短暂离心（例如 10,000-12,000 rpm，30秒），将冻干粉收集于管底。
复溶操作
选择合适的溶剂：
仔细阅读产品说明书，严格按照推荐的溶剂和浓度进行复溶。
通常使用无菌的 PBS 缓冲液或低盐缓冲液（如 10 mM Tris, pH 8.0）。
切勿使用纯水，因为缺乏缓冲能力和合适的离子强度可能导致蛋白沉淀或失活。
轻柔混匀：
向冻干粉中加入推荐体积的溶剂，用移液器枪头轻轻吹打或缓慢上下颠倒混匀。
绝对禁止涡旋震荡，因为剧烈的剪切力会破坏蛋白质的空间结构，导致其变性失活。
如果蛋白难以溶解，可将其置于 4℃ 静置 2 小时以上或在水平摇床上低速摇晃。
达到推荐浓度：
初次复溶时，建议将蛋白浓度配制在说明书推荐的范围内（通常不低于 100 μg/mL），这有助于维持蛋白的稳定性。
关键字： 4EBP1;Human;E.Coli;
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