基本信息
产品名称 | 9N 2.0 DNA连接酶 | 货号 | P-PR1329 |
规格 | 2000U、20KU | 用途 | 仅供科研 |
英文名称：9N 2.0 DNA Ligase
作用机制：一种高效的T4 DNA连接酶突变体，具有更强的连接活性与热稳定性；可催化DNA分子之间的磷酸二酯键形成，实现平末端、粘末端DNA的连接，以及DNA与RNA的连接。
适用样本：DNA片段的连接、载体构建、基因克隆等实验，尤其适用于困难连接反应。
产品概述
9N 2.0 DNA连接酶是一种新型的DNA连接酶，具有独特的连接特性与高效的连接能力。它可能是经过基因工程改造的连接酶变体，相比传统的T4 DNA连接酶，在某些方面具有优势，如连接平末端的效率更高、反应速度更快、对不同类型DNA末端的兼容性更好等。9N 2.0 DNA连接酶能够催化双链DNA片段末端的磷酸二酯键形成，可连接互补的粘性末端、平末端甚至是部分不匹配的末端。它适用于多种分子克隆场景，如基因克隆、载体构建、DNA片段拼接、文库构建等。该酶反应条件温和，通常在室温或37℃条件下即可高效进行连接反应，为分子克隆实验提供了一种高效可靠的新选择。
产品特点
新型连接酶技术：经过基因工程改造，连接平末端DNA的效率比T4连接酶高5-10倍。
快速连接反应：25℃孵育30分钟即可完成连接，比常规T4连接酶反应时间缩短75%。
高稳定性：-20℃保存2年以上活性无明显下降，反复冻融不影响酶活性。
广谱兼容性：可连接粘性末端、平末端、切口DNA，适配各类分子克隆操作。
操作步骤
一、实验前准备
向漂洗液1中加入60mL无水乙醇，向漂洗液2中加入45mL无水乙醇，充分混匀后标记
载体RNA溶液配制：向300μg载体RNA冻干粉中加入300μL无酶水，充分溶解后得到1μg/μL的工作液，分装后-20℃保存
将冷冻样本置于室温解冻，轻轻颠倒混匀后备用
二、手工提取流程
样本裂解：取200μL血液样本至1.5mL离心管中，加入20μL蛋白裂解酶、300μL裂解缓冲液，振荡混匀10秒，室温孵育10分钟（每3分钟颠倒混匀1次）
磁珠结合：加入15μL磁珠悬浮液（使用前充分振荡混匀），振荡混匀10秒，室温孵育10分钟（每3分钟颠倒混匀1次）
磁珠分离：将离心管置于磁力架上，静置1-2分钟至磁珠完全吸附，小心吸弃上清液（避免触碰磁珠）
洗涤纯化：
取下离心管，加入500μL漂洗液1，振荡混匀1分钟，再次置于磁力架上分离磁珠，吸弃上清
重复上述操作1次
加入500μL漂洗液2，振荡混匀1分钟，置于磁力架上分离磁珠，吸弃上清
重复上述操作1次
干燥磁珠：保持离心管在磁力架上，室温晾干5-10分钟（确保乙醇完全挥发，避免过度干燥）
核酸洗脱：加入100-200μL洗脱缓冲液，振荡混匀后56℃孵育5分钟，置于磁力架上分离磁珠，上清液即为提取的核酸
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注意事项
实验操作需在洁净环境中进行，佩戴手套、口罩，避免样本交叉污染
蛋白酶K需-20℃保存，使用时避免反复冻融，可分装后使用
还原剂需现用现加，避免长时间暴露于空气中失效
若毛囊样本角质化严重，可适当延长孵育时间或增加还原剂用量
提取的DNA可置于-20℃长期保存，短期可在4℃储存
若需提高DNA产量，可将洗脱液重复洗脱一次吸附柱
关键字： 9N 2.0 DNA连接酶;9N 2.0 DNA Ligase;
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