基本信息
产品名称 | RTS BL21(DE3)Chaprone助溶表达感受态 | 货号 | P-PR1331 |
规格 | 10T | 用途 | 仅供科研 |
英文名称：RTS BL21(DE3) Chaperone-Enhanced Expression Competent Cells
作用机制：在BL21(DE3)感受态细胞中共表达分子伴侣（如GroEL/GroES、DnaK/DnaJ），帮助重组蛋白正确折叠，减少蛋白聚集与包涵体形成；细胞含T7 RNA聚合酶基因，可通过IPTG诱导重组蛋白表达。
适用样本：重组蛋白的原核表达，尤其适用于表达易形成包涵体的难溶性蛋白。
产品概述
RTS BL21(DE3)Chaprone助溶表达感受态细胞是一种经过基因工程改造的大肠杆菌感受态细胞，专门用于重组蛋白的可溶性表达。BL21(DE3)是常用的蛋白表达宿主菌株，其染色体上整合有T7 RNA聚合酶基因，可通过IPTG诱导表达T7 RNA聚合酶，进而驱动带有T7启动子的表达载体上目的基因的表达。该感受态细胞还共表达分子伴侣（Chaperone），分子伴侣能够辅助重组蛋白进行正确折叠，有效减少蛋白在表达过程中形成包涵体的概率，提高可溶性蛋白的表达量。它适用于表达那些易形成包涵体、难溶性的重组蛋白，尤其适用于膜蛋白、多亚基蛋白复合体等复杂蛋白的表达。感受态细胞转化效率高，操作简便，为重组蛋白的可溶性表达研究提供了有力的工具。
产品特点
分子伴侣共表达：共表达多种分子伴侣（如GroEL/GroES、DnaK/DnaJ/GrpE等），辅助重组蛋白正确折叠。
显著提高可溶性：使难溶性蛋白、膜蛋白的可溶性表达量提高5-50倍，减少包涵体形成。
高效蛋白表达：基于BL21(DE3)菌株，T7启动子介导高效表达，蛋白表达量可达菌体总蛋白的30%以上。
操作简便：与常规BL21(DE3)感受态细胞操作流程一致，无需改变蛋白表达实验流程。
操作步骤
一、样本准备
取1-5mL漱口水样本转移至15mL离心管中，12000rpm离心10分钟，弃上清，收集细胞沉淀。
二、细胞裂解
向离心管中加入200~400μL细胞裂解液，再加入15~20μL蛋白酶K溶液
涡旋震荡10秒充分混匀，将离心管放入75℃恒温震荡器中，900rpm恒温震荡裂解45分钟
裂解完成后短暂离心，将上清液转移至新的离心管中
三、DNA吸附
向裂解上清中加入等体积的结合缓冲液，轻轻颠倒混匀
将混合液全部转移至一次性吸附柱中，12000rpm离心30秒，弃收集管中的废液
向吸附柱中加入500μL漂洗液，12000rpm离心30秒，弃废液；重复此漂洗步骤1次
四、DNA洗脱
将吸附柱放回收集管，12000rpm离心2分钟，彻底去除残留漂洗液
将吸附柱转移至新的1.5mL离心管中，向吸附柱中心加入50~100μL洗脱缓冲液（可预热至65℃提升洗脱效率）
室温静置2分钟，12000rpm离心1分钟，离心管中的液体即为提取完成的基因组DNA
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使用建议
溶解与保存：建议以液体形式保存于-20℃，避免反复冻融。
反应条件：常规反应温度为37℃，灭活需50℃处理5分钟。
推荐用量：根据实验体系优化，通常每50μL反应体系添加0.1-1U。
关键字： RTS BL21(DE3)Chapron;RTS BL21(DE3) Chaper;
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