基本信息
中文名称：T4 多聚核苷酸激酶（3'磷酸酶活性缺失）
货号：P-PR1391
规格：200U、2000U
英文名称：T4 Polynucleotide Kinase (3'-Phosphatase Activity Deficient)
作用机制：催化ATP的γ-磷酸基团转移到DNA/RNA的5'羟基端，使核酸分子5'端带上磷酸基团；缺失3'磷酸酶活性，避免降解核酸3'端结构，可用于核酸连接、测序引物标记、探针标记等实验。
适用样本：DNA/RNA分子的5'端磷酸化修饰、基因克隆连接体系、核酸探针标记实验
产品概述
该酶是经修饰后的T4多聚核苷酸激酶，保留了所有激酶活性，但缺失了3'磷酸酶活性。它能够催化磷酸在ATP的γ-位和寡核苷酸链（双链或单链DNA或RNA）的5′-羟基末端以及3′-单磷酸核苷间进行转移和交换，广泛应用于分子生物学实验中。
产品组成
规格 组分
200U T4 Polynucleotide Kinase（10U/μl）20μ
l、10×T4 PNK Buffer 1ml、10mM ATP 100μl
2000U T4 Polynucleotide Kinase（10U/μl）200
μl、10×T4 PNK Buffer 2ml、10mM ATP 500μl
产品特点
专一性强，仅保留激酶活性，避免3'磷酸酶活性对实验的干扰。
活性高，能高效完成磷酸化和标记反应。
适用范围广，可用于DNA或RNA的5'末端磷酸化、末端标记等多种实验。
操作步骤
常规磷酸化反应：在反应体系中加入适量的DNA/RNA底物、1×T4 PNK Buffer、ATP（终浓度0.5 - 1mM）和
T4多聚核苷酸激酶，37℃温育30分钟。
放射性标记反应：在50μl反应体系中，加入1×T4多聚核苷酸激酶反应缓冲液、50pmol的γ-[32P]ATP和20单位的酶，37℃温育30分钟。
连接前处理：若激酶反应后直接进行连接反应，可在连接酶反应缓冲液中37℃温育30分钟，产物无需热失
活可直接连接；若需保持其他DNA片段去磷酸化状态，需在连接前65℃加热20分钟热失活酶。
注意事项
激酶在新鲜缓冲液中活性最佳，避免使用因DTT氧化导致活力降低的旧缓冲液。
磷酸化平齐末端或5’凹陷末端时，可先将DNA溶液70℃加热5分钟，冰上冷却后加入5%（W/V）的PEG - 8000，以提高磷酸化效率。
反应体系中避免引入铵离子，因为铵离子会抑制酶活性，所以磷酸化步骤前，DNA不要在含铵离子的溶液中沉淀。
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关键字： T4 多聚核苷酸激酶（3'磷酸酶活性缺失;T4 Polynucleotide Ki;
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