基本信息
产品名称 | Hi T7 RNA Polymerase | 货号 | P-PR1295 |
规格 | 10KU | 用途 | 仅供科研 |
英文名称:Hi T7 RNA Polymerase
作用机制:一种高活性的T7 RNA聚合酶,可在体外以线性化的DNA模板为模板,高效合成RNA;具有高转录活性与特异性,可合成各种长度的RNA分子;适用于基因功能研究、疫苗研发等实验。
适用样本:克隆有T7启动子的线性化DNA模板,适用于体外合成mRNA、siRNA、lncRNA等。
产品概述
Hi T7 RNA聚合酶是一种经过基因工程改造与纯化的高活性T7 RNA聚合酶,用于体外高效合成RNA分子。T7 RNA聚合酶能够特异性识别T7启动子序列,并以DNA为模板,催化核糖核苷酸(NTP)聚合形成与模板互补的RNA链。Hi T7 RNA聚合酶相比天然T7 RNA聚合酶,具有更高的转录活性与稳定性,可实现RNA的高产合成,通常每微克模板DNA可合成大量的RNA(可达数百微克)。该酶适用于多种体外RNA合成场景,如RNA结构与功能研究、RNA干扰(RNAi)实验、体外翻译系统、RNA疫苗研发、RNA探针制备等。它操作简便,在合适的缓冲体系与温度条件下(通常37℃)即可高效进行转录反应,合成的RNA纯度高、完整性好,为体外RNA合成提供了高效可靠的工具。
产品特点
转录效率高:每微克模板DNA可合成数百微克RNA,转录产量是普通T7酶的2-5倍。
转录长度长:可合成长达10kb的RNA转录本,满足长链RNA的实验需求。
特异性强:仅识别T7启动子序列,转录特异性高,无杂带。
产物质量好:合成的RNA纯度高、完整性好,可直接用于体外翻译、RNAi、结构研究等实验。
反应条件温和:在37℃条件下即可高效转录,无需特殊的反应条件。
操作步骤
一、样本准备
取1-5mL漱口水样本转移至15mL离心管中,12000rpm离心10分钟,弃上清,收集细胞沉淀。
二、细胞裂解
向离心管中加入200~400μL细胞裂解液,再加入15~20μL蛋白酶K溶液
涡旋震荡10秒充分混匀,将离心管放入75℃恒温震荡器中,900rpm恒温震荡裂解45分钟
裂解完成后短暂离心,将上清液转移至新的离心管中
三、DNA吸附
向裂解上清中加入等体积的结合缓冲液,轻轻颠倒混匀
将混合液全部转移至一次性吸附柱中,12000rpm离心30秒,弃收集管中的废液
向吸附柱中加入500μL漂洗液,12000rpm离心30秒,弃废液;重复此漂洗步骤1次
四、DNA洗脱
将吸附柱放回收集管,12000rpm离心2分钟,彻底去除残留漂洗液
将吸附柱转移至新的1.5mL离心管中,向吸附柱中心加入50~100μL洗脱缓冲液(可预热至65℃提升洗脱效率)
室温静置2分钟,12000rpm离心1分钟,离心管中的液体即为提取完成的基因组DNA
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使用建议
溶解与保存:建议以液体形式保存于-20℃,避免反复冻融。
反应条件:常规反应温度为37℃,灭活需50℃处理5分钟。
推荐用量:根据实验体系优化,通常每50μL反应体系添加0.1-1U。
关键字: Hi T7 RNA Polymerase;
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