基本信息
中文名称：Tth RecA蛋白
货号：P-PR1395
规格：200ug
英文名称：Tth RecA Protein
作用机制：嗜热菌来源的重组酶，与ATP结合后形成核蛋白丝，介导同源DNA序列的识别与配对；催化单链DNA入侵同源双链DNA，形成D-环结构，促进DNA同源重组与损伤修复；高温条件下仍保持活性，适配体外重组实验。
适用样本：体外同源重组实验、高温DNA修复模型、基因编辑辅助体系
产品概述
Tth RecA蛋白是分离自嗜热栖热菌（Thermus thermophilus / Thermus aquaticus）的RecA同源蛋白，在65-75℃的最适温度范围内，具有依赖于单链DNA（ssDNA）的ATP酶活性。凭借极高的热稳定性，它成为核酸扩增、测序等需要高温反应条件的分子生物学技术的理想工具，可用于电镜分析DNA结构、D环突变、RecA蛋白包被探针的文库筛选以及DNA靶位点裂解等应用场景。
产品组成
以常见的200μg规格为例，产品组成如下：
200μg Tth RecA蛋白（浓度为2μg/μl），共计100μl
保存液含50%甘油
产品特点
极端热稳定性：可耐受65-75℃的高温反应环境，在常规RecA蛋白失活的温度下仍能保持活性
序列同源性：与大肠杆菌RecA蛋白具有高度同源性，保留核心功能域的同时优化了耐热特性
底物特异性：严格依赖单链DNA激活ATP酶活性，确保反应的精准性
功能多样性：同时具备DNA链交换活性、ATP水解活性和同源配对活性
保存便利性：-20℃条件下可稳定保存3年，反复冻融不影响活性
操作步骤（以感受态细胞制备与转化为例）
感受态细胞制备
接种单菌落于2ml LB培养液中，37℃过夜培养取0.25ml过夜菌液加入25ml LB培养液，37℃振摇4-6小时至OD₅₉₀=0.4-0.6
转移至50ml离心管，冰浴10分钟后2500-3000rpm离心5分钟，弃上清缓慢加入75mmol/L预冷CaCl₂溶液5ml悬浮菌体，冰浴
20分钟后同条件离心弃上清加入75mmol/L预冷CaCl₂溶液1.0ml轻轻混匀，分装至1.5ml离心管，每管200μl，冰浴1-2小时
重组DNA转化
取200μl感受态细胞，加入10μl重组DNA，轻轻混匀冰浴30分钟至1小时，期间轻轻摇动3次防止菌体沉淀42℃热激90秒，立即置于冰上冷却5分钟
加入800μl无抗生素LB培养基，37℃水浴30-60分钟取200μl菌液涂布于含相应抗生素的LB固体培养基平板室温干燥后，倒置平板于37℃培养箱过夜培养
注意事项
分子量特性：蛋白分子量为36kDa，实验设计时需考虑其大小参数
保存液成分：含50%甘油，避免直接高温煮沸，建议使用前适当稀释
反应体系优化：常规50μl PCR反应体系中推荐加入400ng蛋白，可根据具体实验调整用量
温度控制：所有涉及蛋白孵育的步骤严格控制在65-75℃范围内，避免低温失活
操作规范：全程使用无核酸酶的耗材与试剂，防止外源核酸污染
安全防护：作为微生物来源蛋白，操作时需遵循实验室生物安全规范
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