基本信息
产品名称 | TdT末端转移酶(Terminal Transferase) | 货号 | P-PR1296 |
规格 | 1000U | 用途 | 仅供科研 |
英文名称：Terminal Transferase (TdT)
作用机制：一种不依赖模板的DNA聚合酶，可在DNA分子的3'末端添加同聚物尾（如A尾、T尾、C尾、G尾）；常用于TA克隆、荧光标记、DNA分子修饰等实验；需要Co²+作为辅助因子。
适用样本：DNA片段的末端修饰、TA克隆、荧光标记等实验，适用于基因克隆、测序、突变分析等研究。
产品概述
TdT末端转移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase，TdT）是一种无需模板的DNA聚合酶，能够催化脱氧核糖核苷酸（dNTP）或核糖核苷酸（rNTP）添加到双链或单链DNA分子的3'羟基末端，实现DNA末端的延伸或修饰。它不依赖于DNA模板，随机将核苷酸添加到DNA的3'末端，可添加单个或多个核苷酸。TdT末端转移酶在分子生物学研究中有多种应用，如DNA末端标记（如添加带标记的核苷酸用于后续检测）、3'末端多聚腺苷酸化、DNA文库构建（如在cDNA末端添加同聚物尾用于克隆）、染色体核型分析中的端粒长度检测等。该酶通常需要Co²+作为辅助因子，在合适的缓冲体系与温度条件下发挥活性。TdT末端转移酶的独特催化特性使其成为DNA末端修饰与功能研究中不可或缺的工具酶。
产品特点
无模板合成：无需DNA模板即可催化核苷酸添加到DNA分子的3'末端，功能独特。
核苷酸偏好：优先添加嘌呤核苷酸（A、G），对嘧啶核苷酸（C、T）添加效率较低。
应用广泛：可用于DNA末端标记、3'末端多聚腺苷酸化、cDNA文库构建、端粒长度检测等实验。
辅助因子特殊：需要Co²+作为辅助因子，而非Mg²+，反应体系独特。
产物多样：可添加单个或多个核苷酸，形成同聚物尾或异聚物尾。
操作步骤
一、实验前准备
向漂洗液1中加入60mL无水乙醇，向漂洗液2中加入45mL无水乙醇，充分混匀后标记
载体RNA溶液配制：向300μg载体RNA冻干粉中加入300μL无酶水，充分溶解后得到1μg/μL的工作液，分装后-20℃保存
将冷冻样本置于室温解冻，轻轻颠倒混匀后备用
二、手工提取流程
样本裂解：取200μL血液样本至1.5mL离心管中，加入20μL蛋白裂解酶、300μL裂解缓冲液，振荡混匀10秒，室温孵育10分钟（每3分钟颠倒混匀1次）
磁珠结合：加入15μL磁珠悬浮液（使用前充分振荡混匀），振荡混匀10秒，室温孵育10分钟（每3分钟颠倒混匀1次）
磁珠分离：将离心管置于磁力架上，静置1-2分钟至磁珠完全吸附，小心吸弃上清液（避免触碰磁珠）
洗涤纯化：
取下离心管，加入500μL漂洗液1，振荡混匀1分钟，再次置于磁力架上分离磁珠，吸弃上清
重复上述操作1次
加入500μL漂洗液2，振荡混匀1分钟，置于磁力架上分离磁珠，吸弃上清
重复上述操作1次
干燥磁珠：保持离心管在磁力架上，室温晾干5-10分钟（确保乙醇完全挥发，避免过度干燥）
核酸洗脱：加入100-200μL洗脱缓冲液，振荡混匀后56℃孵育5分钟，置于磁力架上分离磁珠，上清液即为提取的核酸
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注意事项
实验操作需在洁净环境中进行，佩戴手套、口罩，避免样本交叉污染
蛋白酶K需-20℃保存，使用时避免反复冻融，可分装后使用
还原剂需现用现加，避免长时间暴露于空气中失效
若毛囊样本角质化严重，可适当延长孵育时间或增加还原剂用量
提取的DNA可置于-20℃长期保存，短期可在4℃储存
若需提高DNA产量，可将洗脱液重复洗脱一次吸附柱
关键字： TdT末端转移酶(Terminal Tr;Terminal Transferase;
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