重组表达原理:
基因克隆:从牛基因组中获取CST3基因的编码序列(对应氨基酸31–148),插入含有启动子、筛选标记和His标签序列的质粒载体。
宿主表达:将重组质粒转化至E. coli(如BL21菌株),在IPTG诱导下启动蛋白表达。该系统成本低、表达效率高,适合大规模生产。
蛋白纯化:利用His标签与镍柱亲和层析结合,实现高纯度(>95%)蛋白回收,再经透析或凝胶过滤去除杂质。
冻干保存:加入海藻糖作为保护剂,冻干后可长期稳定储存,复溶后保持天然构象和生物活性。
操作要点:
电泳条件:使用15% SDS-PAGE凝胶,以提高对小分子量蛋白(~13.4 kDa)的分辨率。
转膜参数:采用湿转法,100 V、60–90分钟(4°C),使用PVDF膜(需甲醇预活化)。
抗体选择:
一抗:抗CST3多克隆抗体(如兔源抗体),推荐稀释比为1:1000。
二抗:HRP标记的山羊抗兔IgG,稀释比1:10,000。
显色方式:ECL化学发光法,预期条带位于~13.4 kDa处。
内参建议:由于CST3分子量较小,可选用GAPDH(~37 kDa)或β-actin(~42 kDa)作为内参,避免条带重叠。
产品概述:
DDI1 在细胞应激反应和蛋白质稳态中扮演着“多面手”的角色。虽然它在结构上与 HIV 蛋白酶同属于反转录型天冬氨酸蛋白酶家族,但在人类细胞中,它主要作为泛素受体和蛋白酶体衔接蛋白,参与调控蛋白质的降解过程。由于其独特的结构特征,它已成为研究蛋白质降解机制和开发抗寄生虫药物的潜在靶点。
产品名称 | Recombinant Human DDI1 | 货号 | A-01K102009 |
表达区间 | 33-326 | 分子量 | 32.2 kDa |
规格 | 50μg、200ug、1mg | 种属 | Human |
商品介绍:
产品名称:Recombinant Human DDI1
种属:Human
宿主:E.Coli
表达区间:33-326
分子量:32.2 kDa
Greater than 95% as determined by SDS-PAGE
标签:N-terminal His Tag
性状:Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4
纯度:Greater than 95% as determined by SDS-PAGE
应用:Western Blot, ELISA
溶解方法:Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex
存储:-20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution
别称:ddi1, DDI1 DNA damage inducible 1 homolog 1, DDI1_HUMAN, DNA-damage inducible 1, homolog 1, DNA-damage inducible protein 1, FLJ36017, OTTHUMP00000231644, Protein DDI1 homolog 1
使用前准备:
离心处理
冻干粉在运输过程中可能附着于管壁或管盖,开盖前应先进行离心,确保粉末沉降至管底。
建议条件:3000–3500 rpm 离心 5 分钟
若无高速离心机,可适当延长低速离心时间
平衡温度
将冻干粉缓慢恢复至室温(避免加热加速溶解),防止因温差导致管内冷凝水影响蛋白稳定性
溶解(Reconstitution)
溶解液选择
推荐使用无菌蒸馏水或 PBS(pH 7.4)进行复溶
若用于细胞实验,可选用含 0.1% BSA 的缓冲液以增强稳定性
配制浓度
将冻干粉溶解至终浓度 ?0.1–1.0 mg/mL,此范围适用于大多数实验场景
浓度过高可能导致蛋白聚集,过低则易失活
混匀方式
使用移液枪头轻轻吹打数次,或上下轻柔颠倒混匀
严禁使用涡旋振荡器,以免破坏蛋白空间结构,导致活性丧失
储存条件:
冻干粉:储存于-20°C至-80°C,避免反复冻融。
复溶后:储存于2°C至8°C,有效期约1个月;长期存储建议分装后置于-20°C至-80°C。
复溶方法:
离心处理:使用前离心收集冻干粉于管底。
复溶缓冲液:加入无菌PBS(含0.1% BSA)或去离子水,轻轻吹打混匀,避免涡旋震荡。
浓度建议:复溶后蛋白浓度保持在0.1-1.0 mg/mL,分装保存以减少冻融损伤。
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Recombinant Human ERG | Recombinant Human KDM3B |
应用范围:
免疫研究:体外评估抗病毒或抗菌免疫应答,分析炎症反应机制。
细胞培养:添加至细胞培养基中,研究其对巨噬细胞活化的影响。
功能实验:用于中和实验或信号通路研究(如JAK-STAT通路)。
关键字: DDI1;Human;E.Coli;
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