Recombinant Human IRF3说明
IRF3是干扰素调节因子家族的核心成员，作为天然免疫系统中的关键转录因子，在抗病毒防御中扮演“分子开关”的角色。在静息状态下，IRF3以非活性形式存在于细胞质中；当细胞受到病毒感染（如dsRNA）或TLR3/4等刺激时，IRF3会在C端关键丝氨酸/苏氨酸位点被TBK1/IKKε激酶磷酸化，从而发生构象改变、形成二聚体并转位至细胞核。入核后的活化IRF3与CBP/p300等共激活因子结合，启动I型干扰素（IFN-α/β）和干扰素刺激基因（ISGs）的转录，从而建立抗病毒状态。
商品介绍：
A-01K101546-50μg | Recombinant Human IRF3说明 |
A-01K101546-200ug | Recombinant Human IRF3说明 |
A-01K101546-1mg | Recombinant Human IRF3说明 |
别称：IIAE7, Interferon regulatory factor 3, IRF 3, IRF-3, IRF3, IRF3_HUMAN, MGC94729
标签：N-terminal His Tag
种属：Human
宿主：E.Coli
表达区间：2-427
分子量：46.8 kDa
Greater than 95% as determined by SDS-PAGE
应用：Western Blot, ELISA
性状：Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4
纯度：Greater than 95% as determined by SDS-PAGE
溶解方法:Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex
存储:-20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution
检测原理详解：
包被抗体结合
实验开始前，微孔板已预先包被抗人白脂素单克隆抗体。当加入待测样本后，
样本中的人白脂素（Asprosin）会与固相载体上的捕获抗体特异性结合。
形成“夹心复合物”
洗涤去除未结合物质后，加入生物素标记的检测抗体，该抗体与白脂素分子的另一表位结合，
形成“固相抗体—抗原—检测抗体”三明治结构。
酶促显色反应
随后加入?辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素，与生物素检测抗体结合。
最后加入TMB显色底物，在HRP催化下产生蓝色产物，反应终止后变为黄色。
浓度定量分析
黄色深浅与样本中白脂素含量成正比，通过酶标仪在450nm波长处测定吸光度（OD值），
并根据标准曲线计算出样本中白脂素的浓度。
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实验步骤：
1. 基因克隆与表达载体构建
从人类FBN1基因C端序列中扩增Asprosin编码片段（约140aa）。
将目的片段插入原核表达载体，确保带有?N端或C端His标签，便于后续纯化。
转化至?感受态细胞，筛选阳性克隆并测序验证。
2. 重组蛋白诱导表达
取阳性菌落接种于LB培养基（含氨苄青霉素），37℃振荡培养过夜。
次日按1:100比例转接至新鲜LB培养基，37℃培养至OD600达0.6–0.8。
加入IPTG至终浓度0.1–1.0 mM，16–25℃诱导表达6–12小时（低温诱导有助于可溶性达）。
4℃、8000×g离心10分钟收集菌体，弃上清，-20℃保存备用。
3. 菌体裂解与蛋白提取
将菌体沉淀重悬于裂解缓冲液（如PBS + 1% Triton X-100 + 蛋白酶抑制剂），超声破碎
（冰浴条件下，每次30秒，共6–10次，功率30%）。
4℃、12000×g离心20分钟，收集上清（可溶性蛋白）或沉淀（包涵体蛋白）。
若为包涵体蛋白，需用?洗涤缓冲液（含2M尿素的PBS）洗涤2–3次，去除杂蛋白。
4. 亲和层析纯化（Ni-NTA法）
将含His标签的蛋白溶液（或溶解后的包涵体蛋白，使用含6–8M尿素的缓冲液溶解）上样至?Ni-NTA亲和层析柱。
用?洗涤缓冲液（含20–40mM咪唑）洗去非特异性结合蛋白。
用?洗脱缓冲液（含250–500mM咪唑）梯度洗脱目标蛋白，收集洗脱峰。
透析去除尿素与咪唑（使用PBS或生理缓冲液，4℃过夜，更换3次）。
5. 蛋白复性（针对包涵体蛋白）
若蛋白以包涵体形式表达，需在纯化后进行?梯度复性：
将变性蛋白缓慢加入含?梯度降低尿素（6M → 4M → 2M → 0M）的复性缓冲液中，4℃搅拌过夜。或采用?透析法?逐步去除变性剂。复性后再次离心取上清，检测蛋白活性。
关键字： IRF3;Human;E.Coli;
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