土壤纤维素酶(Solid-cellulase,S-CL)活性测定试剂盒说明书
分光光度法 50管/24样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
S-CL主要来源于土壤微生物,S-CL催化农作物秸秆产生的葡萄糖是主要的碳源营养物质。
测定原理:
采用蒽酮比色法测定S-CL催化纤维素降解产生的还原糖的含量。
试剂的组成和配制:
产品名称 | SSQ009-50T/24S | Storage |
试剂一:甲苯 | 10ml(自备) | 4℃ |
试剂二:液体 | 6ml | 4℃ |
试剂三:液体 | 40ml | 4℃ |
试剂四:粉剂 | 1瓶 | 4℃ |
说明书 | 一份 |
试剂四:粉剂×1瓶,4℃保存; 临用前加入5ml蒸馏水和45ml浓硫酸充分溶解待用。
需自备仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、甲苯、硫酸(不允许快递)和蒸馏水。
样品处理:
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干,过30~50目筛。
加样表和测定步骤:
| 对照管 | 测定管 |
风干土样(g) | 0.1 | 0.1 |
试剂一 (μl) | 100 | 100 |
振荡混匀15min |
试剂二(μl ) |
| 180 |
试剂三(μl ) | 740 | 740 |
蒸馏水(μl ) | 360 | 180 |
37℃振荡反应3h后,90℃水浴15min(盖紧,防止水分散失),冷却后
8000g 25℃离心10min,取上清,得糖化液;
糖化液 (μl) | 350 | 350 |
试剂四 (μl) | 650 | 650 |
混匀, 90℃水浴10min(盖紧,防止水分散失),冷却,620nm处蒸馏水调零,测定吸光值A,计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。
S-CL活力计算:
标准条件下测定的回归方程为y = 5.018x - 0.0462;x为标准品浓度(mg/ml),y为吸光值。
单位的定义:每天每g土样中产生1mg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
S-CL活力(mg/d/g)=(ΔA+0.0462) ÷5.018×V反总÷W÷T =19.1×(ΔA+0.0462)
T:反应时间,3h=1/8d; V反总:反应体系总体积:1.2ml;W:样本质量,0.1g。
关键字: 土壤纤维素酶;土壤纤维素酶(S-CL)活性检测试剂盒;
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