人CYP3A41G基因25343GT点突变探针法qPCR检测试剂盒(不含内参)
产品及特点
CYP酶是体内重要的药物代谢酶，分为CYP1, 2, 3等家族，然后分别分为A, B, C等亚家族，末尾再接一个数值表示具体的亚型的酶，如CYP3A4是CYP3A亚家族中的重要一员，其活性在人类肝脏中占总CYP活性的60％，同时其在人体十二指肠、空肠和回肠中均有表达。CYP3A4*1G是目前已发现的中国人所有的CYP3A4单核苷酸多态性中发生频率高的一个位点，是具有功能意义的突变。研究显示该基因多态性可能影响CYP3A4酶活性。因此研究25343G>T突变具有重要的研究意义，为此本公司开发了专门检测25343G>T突变的探针法qPCR检测试剂盒，它有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
2. 引物和探针经过优化，分析灵敏性高，可以达到1000拷贝/μL。
3. 分辨率高，能检测出5%的点突变。
4. 一管式检测，野生型探针用FAM标记，突变型探针用HEX标记。
5. 同时提供野生型和突变型两种阳性对照，便于排除假阴性样品。
6. 特异性高，引物和探针是根据人CYP3A4*1G基因25343G>T突变设计，不会跟其他突变发生交叉反应。
7. 本产品只能定性，不能定量。
8. 本产品足够50次20 μL体系的点突变探针法荧光定量PCR反应。
9. 本产品只能用于科研。
规格及成分
成分 | 规格 | 包装 |
2×点突变Probe qPCR MasterMix | 0.5mL | 0.5 mL本色管 |
超纯水 | 1mL | 1.5 mL蓝盖管 |
人CYP3A4*1G基因25343G>T位点检测引物-探针混合液干粉 | 50次 | 0.5 mL白盖管 |
人CYP3A4*1G基因野生型阳性对照(1×10E4拷贝/μL) | 250μL | 1.5 mL棕色管 |
人CYP3A4*1G基因25343位点突变型阳性对照(1×10E4拷贝/μL) | 250μL | 0.5 mL黄盖管 |
使用手册 | 1份 | 无 |
本产品采用五孔盒包装 |
注 意：使用前需要在引物探针干粉管中加入160 μL的自备超纯水，震荡混匀后再取用一次没用完剩下的需要放-20℃保存。 |
样品DNA的制备
1. 如果有N个样品，则进行N次纯化，得到的DNA溶解在TE中，并需要用NanoDrop进行定量。浓度不能低于0.2 μg/μL。
2.本试剂盒跟市场上大多数样品DNA提取试剂盒兼容。
数据处理
1. 实验有效性的判断：首先分析扩增NC是否有FAM或/和HEX信号，如果有则表示实验污染，本次实验无效，无需分析所有实验数据，需要寻找原因。如果无则表示实验没有污染，再分析三个PC。如果野生型PC没有FAM扩增信号（有标准的倒S扩增曲线，下同），或突变型PC没有HEX扩增信号，或杂合型PC没有FAM和HEX扩增信号，则表示实验无效，不需要分析样本的数据，需要分析原因。如果三个PC正常（野生型PC有FAM扩增信号，突变型PC有HEX扩增信号，杂合型PC有FAM和HEX扩增信号），则实验有效，可以分析样本的数据。
2. 如果荧光定量PCR仪有基因分型的自动分析模块，则进入该模块，获得每个样本的HEX值/FAM值的荧光比值，并根据荧光比值描出散点图。荧光比值位于散点图的X轴方向的样本可以判为突变型，荧光比值将位于Y轴方向的样本可以判为野生型，荧光比值位于X轴和Y轴中间的可以判为杂合子。扩增NC的荧光比值将位于原点附近。散点图的示例如下：
3. 如果荧光定量PCR仪没有基因分型的自动分析模块，则需要手动分析。首先根据Ct值判断每个样本在FAM和HEX两个通道的扩增情况。如果FAM通道的Ct低于35，则算FAM信号有扩增。如果Ct大于35或没有Ct，则算FAM通道无扩增。HEX通道也如此操作。然后根据扩增结果按下表判断每个样本的基因型，得到无效数据的样本需要重复
FAM通道 | HEX通道 | 基因型判断 |
有扩增 | 无扩增 | 野生型 |
有扩增 | 有扩增 | 杂合子 |
无扩增 | 有扩增 | 突变型 |
无扩增 | 无扩增 | 阴性PC或无效数据 |
自备试剂
样品DNA。
运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期1年。
关键字： qRT-PCR试剂盒 ; 探针法试剂盒 ; 人CYP3A41G基因25343GT ;
上海酶联生物科技有限公司，成立之初，获得国内外酶联免疫同行的大力支持，公司为了感恩于同行无私的帮助，特取意酶联免疫吸附测定试剂盒（ELISA试剂盒）的“酶联”两字，时刻铭记回报社会，公司已制定十年内，将公司打造成国内酶联免疫试剂盒（ELISA试剂盒）行业超级航母，并且，这么多年，我们一直是为了这个愿景，坚定不移的努力奋斗着。