Recombinant Human Peroxiredoxin 1规格
重组人源过氧化物酶1(Recombinant Human Peroxiredoxin 1,简称Prx1),亦称硫氧还蛋白过氧化物酶2(TDPX2)或自然杀伤细胞增强因子A(NKEF-A),是一种利用大肠杆菌(E. coli)或昆虫细胞表达系统制备的高纯度抗氧化酶(单体分子量约22-25 kDa,全长约199-206个氨基酸)。作为过氧化物酶家族(ahpC/TSA家族)的关键成员,Prx1广泛分布于人体细胞中,主要通过硫氧还蛋白(Thioredoxin)系统提供还原当量,特异性催化过氧化氢(H₂O₂)
商品介绍:

A-01K101414-50μg | Recombinant Human Peroxiredoxin 1规格 |
A-01K101414-200ug | Recombinant Human Peroxiredoxin 1规格 |
A-01K101414-1mg | Recombinant Human Peroxiredoxin 1规格 |
别称:Heme binding 23 kDa protein, MSP23, Natural killer cell-enhancing factor A, NKEF A, NKEF-A, NKEFA, OSF3, Osteoblast specific factor 3, PAG, Paga, PAGB, Peroxiredoxin 1, Peroxiredoxin-1, PRDX1, PRDX1_HUMAN, Proliferation associated gene A, Proliferation-associated gene protein, PRX1, PrxI, TDPX2, Thioredoxin peroxidase 2, Thioredoxin-dependent peroxide reductase 2
标签:Western Blot,ELISA
种属:Human
宿主:E.Coli
表达区间:1-199
分子量:21.8 kDa
应用:Western Blot, ELISA
性状:Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4
纯度:Greater than 95% as determined by SDS-PAGE
溶解方法:Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex
存储:-20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution
检测原理详解:

包被抗体结合
实验开始前,微孔板已预先包被抗人白脂素单克隆抗体。当加入待测样本后,
样本中的人白脂素(Asprosin)会与固相载体上的捕获抗体特异性结合。
形成“夹心复合物”
洗涤去除未结合物质后,加入生物素标记的检测抗体,该抗体与白脂素分子的另一表位结合,
形成“固相抗体—抗原—检测抗体”三明治结构。
酶促显色反应
随后加入?辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素,与生物素检测抗体结合。
最后加入TMB显色底物,在HRP催化下产生蓝色产物,反应终止后变为黄色。
浓度定量分析
黄色深浅与样本中白脂素含量成正比,通过酶标仪在450nm波长处测定吸光度(OD值),
并根据标准曲线计算出样本中白脂素的浓度。
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实验步骤:
1. 基因克隆与表达载体构建
从人类FBN1基因C端序列中扩增Asprosin编码片段(约140aa)。
将目的片段插入原核表达载体,确保带有?N端或C端His标签,便于后续纯化。
转化至?感受态细胞,筛选阳性克隆并测序验证。
2. 重组蛋白诱导表达
取阳性菌落接种于LB培养基(含氨苄青霉素),37℃振荡培养过夜。
次日按1:100比例转接至新鲜LB培养基,37℃培养至OD600达0.6–0.8。
加入IPTG至终浓度0.1–1.0 mM,16–25℃诱导表达6–12小时(低温诱导有助于可溶性达)。
4℃、8000×g离心10分钟收集菌体,弃上清,-20℃保存备用。
3. 菌体裂解与蛋白提取
将菌体沉淀重悬于裂解缓冲液(如PBS + 1% Triton X-100 + 蛋白酶抑制剂),超声破碎
(冰浴条件下,每次30秒,共6–10次,功率30%)。
4℃、12000×g离心20分钟,收集上清(可溶性蛋白)或沉淀(包涵体蛋白)。
若为包涵体蛋白,需用?洗涤缓冲液(含2M尿素的PBS)洗涤2–3次,去除杂蛋白。
4. 亲和层析纯化(Ni-NTA法)
将含His标签的蛋白溶液(或溶解后的包涵体蛋白,使用含6–8M尿素的缓冲液溶解)上样至?Ni-NTA亲和层析柱。
用?洗涤缓冲液(含20–40mM咪唑)洗去非特异性结合蛋白。
用?洗脱缓冲液(含250–500mM咪唑)梯度洗脱目标蛋白,收集洗脱峰。
透析去除尿素与咪唑(使用PBS或生理缓冲液,4℃过夜,更换3次)。
5. 蛋白复性(针对包涵体蛋白)
若蛋白以包涵体形式表达,需在纯化后进行?梯度复性:
将变性蛋白缓慢加入含?梯度降低尿素(6M → 4M → 2M → 0M)的复性缓冲液中,4℃搅拌过夜。或采用?透析法?逐步去除变性剂。复性后再次离心取上清,检测蛋白活性。
关键字: Peroxiredoxin 1;Human;E.Coli;
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