人E6AP;p53泛素化(E6AP;p53)elisa试剂盒
商品属性:

英文名称 | human E6AP;p53 elisa kit | 灵敏度 | 0.15625ng/ml |
检测范围 | 0.3125ng/ml-20ng/ml | 货号 | PH25520 |
核心参数:

检测原理:双抗体夹心法,特异性识别 E6AP-p53 泛素化复合物,免疫结合显色定量。
种属反应性:仅人源复合物特异性反应。
样本类型:细胞裂解液、肿瘤组织匀浆、核蛋白样本。
检测时间:3.5–4.5h。
保存条件:2–8℃避光冷藏。
特异性:不单独识别游离 E6AP 或 p53,特异性识别泛素化复合物。
板内 / 板间变异系数:板内 CV<8%,板间 CV<10%。
夹心法数据:

| 校准品浓度(ng/mL) | 20.00 | 10.00 | 5.00 | 2.50 | 1.25 | 0.63 | 0.31 | 0.00 |
| OD450/630值 | 2.713 | 1.568 | 0.837 | 0.495 | 0.292 | 0.156 | 0.092 | 0.042 |
| 校正OD值 | 2.672 | 1.526 | 0.796 | 0.453 | 0.250 | 0.115 | 0.050 | 0.000
|
夹心法标曲:


产品定义:

E6AP即E3泛素连接酶,能与HPV病毒E6蛋白结合,介导p53蛋白的泛素化降解,从而抑制p53的肿瘤抑制功能,是HPV诱导细胞癌变的重要机制之一;p53是重要的肿瘤抑制蛋白,参与调控细胞周期、凋亡、DNA损伤修复等过程,其功能失活与多种肿瘤相关。
操作步骤:

试剂准备:所有试剂恢复至室温(18–25℃),洗涤液如有结晶需加热溶解;
标准品配制:将冻干标准品用1mL标准品稀释液溶解,得2000 pg/mL原液,再倍比稀释成7个浓度梯度,另设空白孔(仅稀释液);
加样:每孔加入50μL样本或标准品,37℃孵育30–60分钟;
洗板:弃去孔内液体,用1×洗涤液洗板5次,拍干;
加酶标抗体:每孔加入100μL检测抗体-HRP,37℃孵育1小时;
洗板:同上;
显色:每孔加入50μL底物A + 50μL底物B,37℃避光孵育10–30分钟;
终止:每孔加入50μL终止液,颜色由蓝变黄;
读数:在450 nm波长下用酶标仪测定OD值,根据标准曲线计算样本浓度。
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