人外周血T淋巴细胞

商品属性

细胞简介

人外周血T淋巴细胞分离自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，临床上常用一些方法把骨髓中的造血干细胞释放到血液中，再在从血液中提取分离得到造血干细胞，我们把这样得到的干细胞称为外周血干细胞，在二十一世纪初人类开始的生命方舟计划中首次提出外周血这一新概念。外周血单个核细胞（PBMC）即外周血中具有单个核的细胞，包括淋巴细胞和单核细胞。目前，主要的分离方法是密度梯度离心法，因为血液中各有形成分的比重存在差异，因此得以分离出不同的细胞。T淋巴细胞（T-lymphocyte）来源于骨髓的多能干细胞（胚胎期则来源于卵黄囊和肝）。在人体胚胎期和初生期，骨髓中的一部分多能干细胞或前T细胞迁移到胸腺内，在胸腺激素的诱导下分化成熟，成为具有免疫活性的T细胞。成熟的T细胞经血流分布至外周免疫器官的胸腺依赖区定居，并可经淋巴管、外周血和组织液等进行再循环，发挥细胞免疫及免疫调节等功能。T细胞的再循环有利于广泛接触进入体内的抗原物质，加强免疫应答，较长期保持免疫记忆。T细胞的细胞膜上有许多不同的标志，主要是表面抗原和表面受体。这些表面标志都是结合在细胞膜上的巨蛋白分子。多能干细胞转变为淋巴样前体细胞（Lymphoid precursor）迁移至胸腺，在胸腺素的诱导下，经历一系列有序的分化过程，逐渐在胸腺发育成熟为识别各种抗原的T细胞库。T淋巴细胞进入胸腺后首先经历两个阶段：①早期T淋巴细胞发育阶段，即始祖CIM和CD8双阴性T淋巴细胞（double negative cell，DN）分化为CD4和CD8双阳性T细胞（double positive cell，DP）；②DP细胞分别经历阳性选择阶段和阴性选择阶段获取MHC限制性识别能力和对自身抗原的耐受性，发育为其表面标志为CD4或CD8的单阳性T细胞（single positive cell，SP），迁往周围淋巴器官定居。T细胞是相当复杂的不均一体、又不断在体内更新、在同一时间可以存在不同发育阶段或功能的亚群，但分类原则和命名比较混乱，尚未统一。按免疫应答中的功能不同，可将T细胞分成若干亚群，一致公认的有：1、辅助性T细胞（Helper T cells,Th），具有协助体液免疫和细胞免疫的功能；2、抑制性T细胞（Suppressor T cells,Ts），具有抑制细胞免疫及体液免疫的功能；3、效应T细胞（Effector T cells,Te），具有释放淋巴因子的功能；4、细胞毒性T细胞（Cytotoxic T cells,Tc），具有杀伤靶细胞的功能；5、迟发性变态反应T细胞（Delayed type hypersensitivity T cells,Td），有参与Ⅳ型变态反应的作用；放大T细胞（Ta），可作用于Th和Ts，有扩大免疫效果的作用；6、原始的或天然T细胞（Virgin or Natural T cells），他们和抗原接触后分化成效应T细胞和记忆T细胞；7、记忆T细胞（Memory T cell,Tm），有记忆特异性抗原刺激的作用。T细胞在体内存活的时间可数月至数年。其记忆细胞存活的时间则更长。其中，Th细胞又被称为CD4+细胞，因为其在表面表达CD4（cluster of differentiation 4）。通过与MHCⅡ（主要组织相容性复合体，major histocompatibility complex）递呈的多肽抗原反应被激活。MHCⅡ在抗原递呈细胞（antigen presenting cells,APCs）表面表达。一旦激活，可以分泌细胞因子，调节或者协助免疫反应。Tc细胞又名为CD8+细胞，其表面表达CD8。这类细胞可以通过MHCI与抗原直接结合。淋巴细胞主要包括T淋巴细胞（CD3+），B淋巴细胞（CD19+），NK细胞（CD16+CD56+）。
产品信息

产品名称 人外周血T淋巴细胞

组织来源 外周血

种属 人
产品规格 5×10^5Cells/T25

方法简介：实验室分离的人外周血T淋巴细胞采用取外周血、通过密度梯度离心法结合磁珠分选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测：实验室分离的人外周血T淋巴细胞经CD3免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：包被条件

培养基基础培养基，含IL-2、Penicillin、Streptomycin等

换液频率:每2-3天换液一次

生长特性：悬浮

细胞形态：圆形

传代特性：不建议传代

消化液：人外周血T淋巴细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
生物特征

1. 细胞组成：外周血细胞免疫核心淋巴细胞

2. 形态结构：圆形规则单核细胞，核致密

3. 分子标记：CD3、CD4/CD8、TCR

4. 功能特性：细胞免疫杀伤、免疫调节、免疫记忆形成

核心功能

介导细胞免疫，直接杀伤异常细胞、感染细胞及肿瘤细胞

分化辅助性、调节性 T 细胞，调控整体免疫应答强度

参与免疫监视、免疫耐受，清除体内变异细胞

是机体抗病毒、抗肿瘤、免疫调节核心免疫细胞
原代细胞传代操作指南

传代时机判断

当细胞融合度达到70%-80%时进行传代，此时细胞活力最佳，避免过度融合导致接触抑制

若细胞生长缓慢或形态变差，可提前传代调整密度

具体操作步骤

预处理：提前预热培养基、胰蛋白酶和PBS，准备好无菌离心管、移液管等耗材

消化细胞：吸弃旧培养基，用PBS轻轻冲洗细胞表面1-2次，去除残留血清；加入适量胰蛋白酶（覆盖细胞表面即可），37℃孵育1-3分钟，期间在显微镜下观察，待细胞边缘收缩、变圆且开始脱落时终止消化

终止消化与收集：加入等量含血清的培养基中和胰蛋白酶，用移液管轻轻吹打培养瓶壁，使细胞完全脱落形成细胞悬液；将细胞悬液转移至离心管，以1000rpm离心5分钟

重悬与接种：弃上清，用预热的完全培养基重悬细胞，按1:2-1:3的比例接种至新的培养瓶，补充培养基后轻轻摇匀，放入培养箱继续培养

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