细胞详述:肾静脉,起自肾门,在同名动脉前方横向内侧注入下腔静脉,越过腹主动脉前面,并接受左肾上腺静脉和左睾丸(卵巢)静脉。平滑肌细胞的生长能力为原发血管疾病的重要异常因素;平滑肌细胞能够表达钙通道及ICAM-1和VCAM-1,其参与血管壁的炎症反应,并与血管疾病的进展和稳定相关。
三、使用方法 大鼠海绵体平滑肌细胞是一种贴壁细胞,细胞形态呈成纤维细胞样,标准操作流程下,细胞可传3-5代左右;3代以内状态最佳;建议您收到细胞后尽快进行相关实验 。 客户收到细胞后,请按照以下方法进行操作。
1. 取出T25细胞培养瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、饱和湿度 的细胞培养箱中静置3-4h,以稳定细胞状态。
2. 贴壁细胞消化 1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中,轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养 瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃温浴1-3min;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变 圆后,再加入5ml完全培养基终止消化; 3)用吸管轻轻吹打混匀,按传代比例接种T25培养瓶传代,然后补充新鲜的完全培养基至5 mL,置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养; 4)待细胞完全贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
3. 细胞实验 因原代细胞贴壁特殊性,贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿(如玻璃爬片、培 养板、共聚焦培养皿等)时,需要对实验器皿进行包被,以增强细胞贴壁性,避免细胞因 没贴好影响实验;包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚赖氨酸PLL(0.1mg/ml ),明胶(0.1%),依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
四、注意事项
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2. 在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作。
3. 传代培养过程中,胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于沟通;由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,详 尽告知细 胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。
5. 该细胞只可用于科研。

细胞培养步骤
a、细胞传代:如果未超过80%汇合度时,将瓶装的完全培养液收集至离心管中,留5ml完全培养基,放入37℃、5%CO2孵箱培养;如果细胞密度超80%,即可进行传代培养。
贴壁细胞传代步骤如下:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞,使之完全脱落后吸出,然后将悬液转移至15ml离心管中,在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例进行分瓶传代(两个T25瓶),补充新的完全培养基至5-8ml/瓶,最后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。
悬浮细胞传代步骤日下:
1、半换液法
半换液处理,竖着培养瓶在培养箱静置1小时左右,轻轻吸掉3ml左右培养基,然后补给3ml的完全培养基,如果培养基变色慢,可直接加500ul左右FBS,传代的时候可以直接补给5ml培养基 分两个培养瓶培养,一般这样传代3次左右可以离心传代一次,去掉死细胞。
2、离心换液法
如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中1000rpm,离心5min,弃去上清,补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
b、细胞冻存:
1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃T25培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心 5min;
3、 弃上清,沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液(货号:C7001),混匀后加入冻存管中。
4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可,如后期要将细胞转入液氮罐中,则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。
C、细胞复苏:
1、从液氮中取出细胞冻存管(注意佩戴防护面具),快速将其置入 37℃水浴中解冻, 直至冻存管中无结晶,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁;
2、将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中,1000rpm离心5min;
3、弃上清,沉淀用5ml完全培养基重悬,接种至T25培养瓶,放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
4、第二天,换用新鲜完全培养基继续培养。
小鼠肾静脉平滑肌细胞注意事项:有些细胞贴壁不牢,在运输过程中容易发生细胞脱落,这是正常现象。如脱离较多可将培养瓶所有培养液收集至离心管,1000rpm离心5min,收集上清作过渡培养(后期对比培养),沉淀加入胰酶1-2ml,轻轻吹打,重悬,消化1-2分钟后,加5ml完全培养基终止反应。再离心,弃上清,加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代(两个T25),补充新的完全培养基至5-8ml/瓶,最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。
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上海雅吉生物科技的核心业务主要围绕生命科学研究所需的各类试剂、细胞、抗体及技术服务展开,具体可归纳为以下几个方面:
细胞产品与技术平台:
细胞产品:提供包括正常细胞、肿瘤细胞、肿瘤耐药细胞在内的多种细胞系。同时,公司也是美国ScienCell等品牌的原代细胞产品的代理商。
稳转细胞株构建服务:公司具备丰富的蛋白表达研究经验,能够为客户提供从基因序列到稳定细胞株交付的一站式定制服务,应用于基因功能研究、药物筛选和重组蛋白生产等领域。
科研试剂:这是公司的基础和优势业务。产品线全面覆盖了分子生物学、免疫学、细胞生物学和微生物学等多个学科。
ELISA试剂盒:提供人、大鼠、小鼠、犬、鱼、鸡、牛等多种物种以及植物的ELISA检测试剂盒,在国内众多重点实验室中广泛使用并被科研文献引用。生化试剂、抗体与血清:提供包括一抗、二抗、单克隆/多克隆抗体在内的多种抗体产品,以及胎牛血清等细胞培养用血清。
蛋白研究相关试剂盒:提供超过300种针对不同样本来源(动物、植物、微生物)和不同细胞器(如线粒体、外泌体)的蛋白提取及检测试剂盒。