大鼠趋化因子(fractalkine/CX3CL1)ELISA试剂盒

本试剂盒运用双抗体夹心ELISA核心原理检测大鼠趋化因子（fractalkine/CX3CL1），酶标板微孔内包被纯化的CX3CL1特异性捕获抗体。加入待测样本和梯度标准品后，样本中的靶标抗原与固相抗体特异性结合，孵育洗板后加入酶标记检测抗体，形成完整的免疫夹心复合物。洗板去除游离物质后进行底物显色，吸光度值与样本中CX3CL1的含量呈正相关，通过标准曲线回归分析，可精准定量大鼠趋化因子的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测值0.1pg/mL，超高灵敏度适配微量趋化因子检测。

检测范围：0.3pg/mL - 160pg/mL，适配大鼠炎症浸润、免疫趋化、肿瘤转移模型。

反应时间：全流程反应150分钟，长时间孵育保障低丰度细胞因子结合完全。

保存条件：2 - 8℃避光密封保存，抗体组分单独存放，避免污染失活。

有效期：原装试剂盒有效期6个月，低温恒定保存活性稳定。

特异性：特异性识别大鼠CX3CL1趋化因子，与其他趋化因子家族蛋白无交叉反应。

重复性：板内CV≤5.8%，板间CV≤7.8%，实验重复性良好。

注意事项：细胞上清、组织匀浆样本需充分离心除杂；样本避免反复冻融，防止细胞因子降解；温育过程杜绝孔板干燥。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

1. 试剂盒试剂室温放置 29min，稀释洗涤浓缩液；细胞培养上清样本离心去除悬浮细胞。

2. 排布酶标板孔位，标准品孔加入梯度 CX3CL1 标准品 50μL，样本孔加入待测上清 50μL，空白孔无加样。

3. 检测孔加入酶标记二抗工作液 100μL，封板膜密封严实。

4. 37℃避光孵育 66min，完成一步法免疫复合物结合。

5. 倒掉孔内液体，洗涤液浸泡 30s，洗板 5 次，倒置拍干微孔残留洗液。

6. 依次添加显色 A、B 液各 50μL，震荡混匀，37℃避光显色 17min。

7. 终止液终止底物反应，450nm 读取吸光度值，依据标准曲线定量趋化因子含量。