大鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA试剂盒

本试剂盒依托双抗体夹心ELISA检测原理，将纯化的大鼠PEDF特异性单克隆抗体固定于酶标板微孔作为固相载体。加入待测样本和标准品后，其中的PEDF抗原与固相抗体特异性结合，洗涤去除未结合杂质，再加入酶标记的PEDF多克隆抗体，形成特异性夹心免疫复合物。经TMB底物显色、酸性溶液终止反应后，检测吸光度值，其数值与样本中PEDF含量呈正相关，通过标准曲线可定量分析大鼠PEDF的表达水平。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测下限0.18ng/mL，可检出极低浓度PEDF蛋白。

检测范围：0.4ng/mL - 80ng/mL，适用于大鼠眼组织、血清、脑组织匀浆样本。

反应时间：全程105分钟，抗原温育45分钟、酶标抗体温育35分钟、显色25分钟。

保存条件：2-8℃密封冷藏，显色液单独避光保存，避免氧化失效。

有效期：未开封有效期10个月，开盖后组分2周内用完最佳。

特异性：仅识别大鼠PEDF，与血管内皮生长因子等眼部调控因子无交叉反应。

重复性：板内CV≤7%，板间CV≤9%，实验重复性稳定可靠。

注意事项：眼组织样本需低温快速处理，防止蛋白降解；温育温度波动不超过±1℃。
试剂盒组成：

预包被抗体/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕获抗体/抗原，结合目标物

标准品 6支/套 制备标准曲线，定量检测依据

生物素标记抗体/抗原 1瓶 识别并结合目标物，提供酶结合位点

辣根过氧化物酶（HRP）标记亲和素 1瓶 与生物素结合，催化底物显色

底物溶液A、B 各1瓶 混合后作为酶促反应底物，产生颜色变化

终止液 1瓶 终止酶促反应，稳定显色结果

浓缩洗涤液 1瓶 清洗微孔板，去除未结合物质

封板膜 2张 孵育过程中防止污染和挥发

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实验操作流程：

试剂盒室温放置 32min，配制洗涤工作液，梯度制备 PEDF 标准品溶液，拆分酶标板条并标注孔位类型，制备大鼠组织上清待测样本。

标准品孔加入梯度 PEDF 标准液 50μL，样本孔加入预处理待测样本 50μL，空白孔加基础稀释液 50μL，每孔加入酶标抗体工作液 100μL，封膜封口。

37℃避光孵育 62min，固相载体完成抗原夹心捕获。

撕掉封板膜倾倒废液，洗涤液浸泡每孔 32s 后甩干，连续洗板 5 次，拍干板条多余液体。

每孔分别添加显色液 A、B 各 50μL，混匀后 37℃避光显色 17min。

滴加终止液 50μL 终止酶促显色，小幅振荡酶标板混匀。

450nm 波长检测 OD 值，根据标准曲线计算 PEDF 样本浓度。