本试剂盒基于双抗体夹心ELISA检测原理，酶标板微孔固相包被有大鼠PI特异性单克隆抗体，加入梯度浓度标准品及大鼠待测样本后，样本中的胰岛素原与固相抗体发生特异性免疫结合，洗板去除游离成分后，加入辣根过氧化物酶标记的PI检测抗体，孵育形成特异性免疫复合物，经彻底洗板去除未结合酶标抗体，加入底物液催化显色，显色强度与样本中PI含量成正比，通过检测吸光度值并拟合标准曲线，可精准定量大鼠样本中的胰岛素原含量。
基本参数：
产品名称：大鼠胰岛素原(PI)ELISA试剂盒
英文名称：PI ELISA Kit
货号：Y-E1335
规格：48T/96T
灵敏度：最低检测浓度0.5pmol/L
检测范围：1pmol/L - 100pmol/L
反应时间：全程150分钟（样本孵育90min，酶标孵育30min，显色30min）
保存条件：全套试剂2-8℃避光冷藏，标准品稀释后-20℃分装冻存
有效期：未开封储存有效期12个月
特异性：精准识别大鼠胰岛素原，不与成熟胰岛素、胰高血糖素发生交叉反应
重复性：板内变异系数CV≤5%，板间变异系数CV≤7%
注意事项：血清样本需离心去除溶血、脂血杂质；标准品现配现用，稀释后不可长期存放；终止液加入顺序需统一，保证显色均匀
关键注意事项：
实验前需仔细阅读对应试剂盒的说明书，不同试剂盒的孵育时间、加样量可能存在差异
所有试剂需按要求储存，未用完的试剂需密封后放回规定温度（通常2-8℃或-20℃）
避免试剂污染，不同组分的移液器枪头需分开使用
洗板时需确保每孔都被洗涤液覆盖，防止出现假阳性结果
显色过程需避光，避免阳光直射影响结果
实验步骤如下：
试剂盒常温放置 25min 回温，按说明书配比浓缩洗涤液，梯度稀释 PI 标准品，酶标板分区标记阴性对照、标准梯度、待测样本。
标准品孔加入不同浓度 PI 标准品 50μL，待测样本孔添加 50μL 预处理完毕的大鼠血浆样本，空白孔空置不加液。
所有非空白孔加入一步法酶标记抗体工作液 100μL，封板封口，37℃温箱孵育 45min。
倒掉孔内反应液，每孔注满洗涤液浸泡 40s 后拍干，循环洗板 4 次，彻底去除未结合游离组分。
每孔分别滴加显色底物液 A 液与 B 液各 50μL，遮光 37℃孵育 12min 进行显色。
每孔加入终止液 50μL 终止酶促显色，轻微震荡酶标板使液体充分混匀。
酶标仪 450nm 读取吸光度值，拟合标准曲线方程，换算样本胰岛素原 PI 实际浓度。
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