本试剂盒依托间接ELISA检测原理，以纯化的大鼠胰岛细胞特异性抗原为包被抗原，固定于酶标板微孔中，加入大鼠血清、组织液等待测样本，样本内的胰岛细胞抗体可与固相抗原特异性结合，经洗涤去除未结合物质后，加入酶标记抗大鼠免疫球蛋白抗体进行特异性结合，孵育洗涤后加入底物显色，显色程度与样本中ICA浓度呈正相关，通过测定吸光度值并比对标准曲线，实现对大鼠胰岛细胞抗体的定量检测。
基本参数：
产品名称：大鼠胰岛细胞抗体(ICA)ELISA试剂盒
英文名称：ICA ELISA Kit
货号：Y-E1204
规格：48T/96T
灵敏度：最低检测滴度1:20
检测范围：1:20 - 1:1280
反应时间：全程210分钟（样本孵育150min，酶标孵育30min，显色30min）
保存条件：2-8℃避光密封保存，剩余微孔板条密封防潮
有效期：未开封储存有效期8个月
特异性：特异性识别大鼠胰岛细胞抗体，与甲状腺抗体、肾上腺抗体等自身抗体无交叉反应
重复性：板内变异系数CV≤8%，板间变异系数CV≤10%
注意事项：样本需无黄疸、无溶血；孵育温度严格控制在37℃，偏差不超过±1℃；显色时间需精准把控，避免过深或过浅影响判读
实验前准备工作：
1. 试剂平衡与稀释
试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。
浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。
标准品复溶 / 梯度稀释：
冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；
按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。
待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。
2. 耗材与设备准备
设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。
耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。
取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。
3. 孔位规划标记
酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：
试剂盒室温静置 30min，稀释洗涤缓冲液，梯度配制 ICA 标准品溶液，标记酶标板各类检测孔。
标准品孔加梯度 ICA 标准品 50μL，待测孔加入 50μL 大鼠血清样本，空白孔无液体添加。
除空白孔外每孔加入一步法酶标记二抗工作液 100μL，封板膜密封，37℃孵育 60min。
弃去孔中液体，洗涤液加满每孔静置 30s，甩干洗涤，连续洗板 5 次，拍干残留液体。
每孔加入底物显色液 A、B 各 50μL，避光 37℃显色 16min。
加入终止液 50μL 终止反应，轻柔振荡酶标板混匀。
450nm 波长酶标仪读数，根据标准曲线定量样本胰岛细胞抗体 ICA 含量。
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