大鼠乙酰胆碱(Ach)ELISA试剂盒

本试剂盒采用竞争法ELISA检测原理，酶标板微孔包被有大鼠乙酰胆碱特异性抗原，实验过程中，样本中的Ach与固相包被抗原竞争性结合有限的酶标记特异性抗体，样本中乙酰胆碱含量越高，结合在固相载体上的酶标抗体就越少，后续加入底物显色后的显色深度越浅，通过检测吸光度值，依据竞争抑制标准曲线，即可反向定量计算出大鼠待测样本中Ach的含量。
基本参数‌：

产品名称：大鼠乙酰胆碱(Ach)ELISA试剂盒

英文名称：ACH ELISA Kit
货号：Y-E1426

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测浓度0.2nmol/L

检测范围：0.5nmol/L - 20nmol/L

反应时间：全程130分钟（样本孵育70min，酶标孵育30min，显色30min）

保存条件：2-8℃避光密封保存，乙酰胆碱标准品-20℃冻存

有效期：未开封储存有效期9个月

特异性：特异性检测大鼠乙酰胆碱，与胆碱、乙酰胆碱酯酶无交叉反应

重复性：板内变异系数CV≤6%，板间变异系数CV≤9%

注意事项：神经组织样本需快速处理，防止Ach降解；实验全程避光，避免物质氧化；样本避免反复冻融，保证活性稳定
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

试剂盒室温平衡 30min，稀释洗涤液，逐级配制 Ach 标准品稀释体系，标记酶标板各类检测微孔。

标准孔加入梯度乙酰胆碱标准品 50μL，待测孔加入 50μL 大鼠脑组织上清样本，空白孔不加试剂。

所有检测孔加入一步法酶结合抗原工作液 100μL，封板膜密封，37℃孵育 52min。

弃去孔中废液，洗涤液加满静置 30s 后甩干，重复洗板 5 次，吸干孔底残液。

每孔添加显色液 A、B 各 50μL，避光 37℃显色 16min。

逐孔加入终止液 50μL 终止显色反应，轻晃板面混匀。

酶标仪 450nm 测 OD 值，绘制标准曲线，测算样本乙酰胆碱 Ach 含量。
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