大鼠维生素D(VD)ELISA试剂盒

本试剂盒运用竞争性ELISA检测原理，基于大鼠VD的抗原抗体特异性结合特性建立检测体系。酶标板包被VD特异性抗原，样本与标准品中的VD与固相抗原竞争结合限量抗体，洗涤去除未结合物质后，通过酶促显色反应产生有色产物。产物吸光度与样本中VD含量呈负相关，依据标准曲线的定量关系，可准确检测大鼠样本中总维生素D的含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤2ng/mL

检测范围：3ng/mL - 100ng/mL

反应时间：全程120分钟，分步孵育60分钟、30分钟，显色30分钟

保存条件：2-8℃保存，核心抗体试剂单独避光存放，禁止冷冻

有效期：未开封12个月，开盖后25天内使用

特异性：识别大鼠总维生素D，与VD2、VD3同源衍生物轻微交叉，不影响检测结果

重复性：板内CV≤4%，板间CV≤6%

注意事项：样本需避免光照，VD见光易分解；不同批次试剂盒不可混用；读数需在终止后15分钟内完成。
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

公司正在出售的产品：

实验操作流程：

试剂盒全部组分室温平衡 30min，配制 VD 标准品系列浓度，样本稀释后分装上样，空白孔仅稀释液，每孔 50μL。

每孔添加酶标记抗原抗体复合物 50μL，密封酶标板，37℃孵育 75min。

反复洗板 5 次，每次浸泡 35s，吸水纸吸干微孔底部残液。

加入显色底物 A、B 各 50μL，轻柔振荡，37℃避光显色 22min。

加入终止液 50μL 混匀终止显色。

酶标仪 450nm 测定各孔吸光度。

利用标准曲线计算稀释样本 VD 浓度，还原原液浓度。