大肠埃希菌是药典微生物限度检查中绑定的控制菌指标，几乎每一批非无菌制剂放行都要跟它打交道。ATCC 8739作为国际上使用最广泛的大肠埃希菌标准菌株之一，从药典方法验证到培养基适用性检查，再到消毒剂效力评价，出场率极高。本文结合笔者多年的实验室经验，对这株菌的特性、培养要点、药典应用及保藏管理做系统梳理，供同行参考。
菌株基本信息
ATCC 8739的完整分类学名称为 Escherichia coli (Migula) Castellani and Chalmers，又称Crooks株。该菌株最初分离自人类粪便，属于BSL-1（生物安全一级）级别，对健康成年人基本无致病性，在常规微生物实验室即可操作。ATCC 8739经检测志贺毒素基因（stx1、stx2）均为阴性，与产志贺毒素的高致病性大肠埃希菌（如O157:H7）有本质区别。正是因为安全性好、表型稳定、药典认可度高，ATCC 8739才成为QC实验室的常备菌株。
生物学特性与形态
ATCC 8739为革兰阴性短杆菌，菌体大小约1-3 um x 0.4-0.7 um，无芽胞，有周身鞭毛，能运动。在营养琼脂（NA）平板上35-37 C培养18-24小时后，菌落呈灰白色、圆形、表面光滑、湿润、边缘整齐，直径约2-3 mm，是典型的大肠埃希菌菌落特征。
生化鉴定方面，Crooks株的IMViC反应结果为：吲哚试验阳性（+）、甲基红试验阳性（+）、V-P试验阴性（-）、枸橼酸盐利用试验阴性（-），即经典的"+ + - -"模式，是鉴别大肠埃希菌与产气肠杆菌等近似菌种的关键依据。此外，该菌株能发酵乳糖产酸产气，在选择性培养基的应用中尤为重要。
培养条件与操作要点
ATCC 8739的常规培养基可选营养琼脂（NA，即ATCC Medium 3）、胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）或胰蛋白胨大豆肉汤（TSB），培养温度35-37 C，培养时间18-24小时。笔者实验室日常传代和计数主要用NA，菌落形态清晰，计数方便。
值得单独说一下的是麦康凯琼脂（MacConkey agar）的应用。由于ATCC 8739能发酵乳糖产酸，在麦康凯平板上会形成粉红色至红色的菌落，有时可见胆盐沉淀环。这个特征在做方法验证或培养基适用性检查时非常实用——可以直观地区分大肠埃希菌（乳糖发酵菌，粉红）和沙门氏菌等不发酵乳糖的肠道菌（无色菌落），省了不少生化鉴定的时间。
冻干菌种的复苏操作建议在生物安全柜内进行。用无菌注射用水或适宜培养基重悬后，接种到液体培养基中35-37 C培养18-24小时进行活化。活化后的菌悬液如短期使用，可2-8 C保存，但建议不超过1-2周，且期间需检查有无污染或活力下降。
在各药典及标准中的应用
ATCC 8739在多国药典和行业标准中均有明确规定，覆盖范围相当广。以下按标准类型逐一列出：
美国药典（USP）： USP<51>抗菌效力测试中用作挑战菌；USP<61>微生物计数法中作为培养基适用性检查的试验菌；USP<62>特定微生物检查中，大肠埃希菌本身就是非无菌制剂必须检测的控制菌指标；USP<71>无菌检查法中用于培养基促生长能力验证。可以说USP四大微生物通则都用得到它。
欧洲药典（EP）： EP 2.6.12（非无菌产品微生物计数-微生物计数法）、EP 2.6.13（非无菌产品微生物检查-特定微生物检测）、EP 5.1.3（药品制剂的微生物质量）、EP 5.1.4（非无菌药品微生物限度标准）均涉及该菌株的使用。
中国药典2020年版： 四部通则1105（非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法）、1106（非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法）、1107（非无菌药品微生物限度标准）、1121（抑菌效力检查法）均将大肠埃希菌列为必检控制菌或方法验证用标准菌株。在国内药品和保健品行业，ATCC 8739的使用频率极高。
英国药典： 附录XVI B（2003版）中同样收载了大肠埃希菌作为微生物质控标准菌株。
行业及国标标准： 《消毒技术规范》（2002年版）将大肠埃希菌8099或等效标准菌株用于消毒剂杀菌效力鉴定试验；ISO 11930规定了化妆品防腐效力评价中使用大肠埃希菌作为挑战菌的要求；GB 15979一次性使用卫生用品卫生标准中，大肠埃希菌也是卫生指标菌之一。
在行业质控中的典型用途
除了药典规定的检测项目，ATCC 8739在日常QC工作中还有很多实际用途。培养基适用性检查是最常见的场景——每批新配制的NA、TSA、麦康凯琼脂等培养基在使用前都需用标准菌株验证其促生长能力和选择性，ATCC 8739就是常选菌种。
在防腐效力挑战试验中，ATCC 8739代表革兰阴性菌参与挑战接种，是评价液体制剂、半固体制剂防腐体系有效性的重要指示菌。消毒剂效力验证也是类似逻辑，用定量标准菌悬液与消毒剂作用规定时间后计数存活菌数，计算杀灭对数值。在方法验证和实验室能力验证中，ATCC 8739也是最常被指定的革兰阴性代表菌之一。
菌种保藏与传代管理
菌种保藏是QC实验室管理中的基础但容易出问题的环节。ATCC 8739的推荐保藏方式主要有两种：冻干粉在2-8 C密封避光条件下可保存2年以上，这是最省心的方式，适合长期储备；-80 C甘油保藏法（15%-25%甘油-肉汤混合液）可稳定保存6个月以上，适合实验室日常取用。
关于传代次数，行业普遍遵循的原则是从原始冻干菌种复苏后传代不超过5代。笔者建议建立菌种使用台账，每株标准菌标注来源批号、复苏日期、传代次数和废弃日期。传代过程中若发现菌落形态变异、生化反应偏离预期、或在麦康凯平板上不再呈现典型粉红色菌落，应立即停用并更换新批次菌种。活化后的工作菌悬液2-8 C保存不应超过1-2周，超期需重新复苏。
操作安全与注意事项
虽然ATCC 8739属于BSL-1级别，理论上对健康人群不构成显著危害，但实验室操作中仍须严格执行无菌操作规范。所有涉及活菌的操作应在生物安全柜或洁净工作台内进行，操作者需穿戴实验服、手套，必要时佩戴口罩。即便是非致病菌，大浓度吸入气溶胶也可能引起不适。
废弃菌液和培养物需经121 C高压灭菌至少30分钟后方可按一般生物废弃物处理。工作台面用75%乙醇或有效氯消毒液擦拭消毒。操作完毕后务必认真洗手。如果实验室同时操作致病菌株（如沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等），要注意器具和区域的严格区分，避免交叉污染导致假阳性结果。
常见问题与工程师建议
问：麦康凯平板上ATCC 8739菌落颜色偏浅，不够红，是不是菌种有问题？
这种情况比较常见。首先检查麦康凯平板是否在有效期内、储存温度是否合规（2-8 C避光）。培养基中胆盐浓度偏高或存放时间过长都可能抑制乳糖发酵反应，导致菌落颜色偏淡。建议同步接种已知合格的对照平板做比较。如果对照平板也偏浅，大概率是培养基的问题，换批次即可。
问：复苏后菌液浓度总是达不到10^8 CFU/mL的要求，怎么调？
冻干菌种复苏第一代活力可能偏低，建议活化后转接一次新鲜培养基，在35-37 C振荡培养16-18小时（对数生长末期），此时菌液浓度通常可达10^8-10^9 CFU/mL。如果仍不达标，检查培养温度和培养基的新鲜度。
问：传代超过5代但菌种性状看起来正常，还能继续用吗？
不建议。菌种传代过多后，即使表型看似正常，基因层面可能已累积突变，在药典合规检查或外部审计时会被质疑数据可靠性。审计员通常会核查菌种传代记录，超代使用属于常见的不合格项，复苏新菌种的成本远低于合规风险。
问：工作菌悬液2-8 C保存超过两周，外观没变化，还能用吗？
外观正常不代表活菌数和活力没有变化。低温保存期间菌体持续缓慢死亡，活菌浓度下降会导致接种量不准确，直接影响试验结果。建议严格按照1-2周的时限管理，到期废弃。
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免责声明： 本文所述菌株信息及技术参数均来源于ATCC官网、美国药典(USP)、欧洲药典(EP)、《中国药典》2020年版、ISO国际标准及《消毒技术规范》等公开权威资料，仅供专业技术参考。具体实验操作请以产品随附的质检报告(COA)和说明书为准，并严格遵守所在机构的生物安全管理制度。本文不构成任何产品推荐或使用建议。
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