人心纳素(ANF)ELISA试剂盒

本试剂盒依托经典双抗体夹心ELISA技术，微孔板固定抗人ANF特异性抗体，加入不同浓度标准品和待测生物样本，样本中的ANF抗原与固相抗体特异性结合，孵育结束后洗涤去除未结合物质，加入HRP标记的ANF配对抗体完成夹心结合，经底物显色、终止反应后检测吸光度，根据标准曲线线性关系定量检测样本中ANF的含量。
产品参数：

‌灵敏度：1.5pg/mL

检测范围：3.12~200pg/mL

反应时间：样本孵育 98min，酶标记二抗 63min，显色 17min

保存条件：2～8℃避光，多肽标准品避免反复冻融

显色系统：HRP 催化 TMB 显色，终止后颜色稳定 30min

检测波长：450nm，650nm 扣除背景

标准曲线绘制：四参数 Logistic 拟合标准曲线计算样本 pg 级浓度

注意事项：采血时患者不可剧烈活动，体位需平躺 30min 后取样，体位会显著影响 ANF 分泌水平
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒常温静置 26min 回温，稀释一步法酶标二抗工作液，标记空白、标准、样品孔。

各孔先加酶结合液 50μL，标准孔加梯度 ANF 标准液 50μL，待测孔加血清样本 50μL，空白孔补稀释缓冲液。

密封微孔板，37℃孵育 73min，弃液后洗板 5 次，每次浸泡 33s，彻底拍干孔板。

依次添加显色 A、B 液各 50μL，轻柔混匀。

避光 37℃显色 16min。

滴加终止液 50μL 终止显色。

450nm 检测 OD，换算心纳素样本浓度。