人脂氧素A4(LXA4)ELISA试剂盒

本试剂盒采用竞争法酶联免疫吸附试验原理，酶标板微孔预先包被人脂氧素A4固相抗原，检测时将待测样本、梯度标准品与定量特异性一抗同步加入微孔，样本中的LXA4与固相抗原竞争结合有限的抗体结合位点，孵育反应后洗涤，加入HRP标记二抗进行结合反应，再次洗涤后底物显色、终止反应，样本中LXA4含量越高，显色越浅，通过检测OD值并拟合标准曲线，可精准定量样本中脂氧素A4的浓度。
基本参数‌：

产品名称：人脂氧素A4(LXA4)ELISA试剂盒

英文名称：LXA4 ELISA Kit
货号：Y-E2635

规格：48T/96T

灵敏度：检出下限 0.04pg/mL

检测范围：0.08pg/mL - 5.12pg/mL

反应时间：全程避光操作，孵育 65min、55min，显色 18min

保存条件：全程 2-8℃避光，底物液必须遮光存放

显色系统：避光型 TMB 显色体系，强光会造成底物失效

检测波长：450nm

标准曲线绘制：全程避光加样，空白孔避光处理后拟合标准曲线

注意事项：脂氧素极易光解，加样、孵育、显色全程遮光，操作速度尽量加快
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

试剂盒避光室温平衡 30min，避光梯度稀释 LXA4 标准品，血浆样本避光稀释预处理，避光标记酶标板。

弱光环境下加样，空白孔加避光稀释液，标准孔加梯度 LXA4 标准品，样本孔加入待测血浆。

弱光下直接加入酶标记抗体工作液，轻晃酶板混匀，全程避免强光直射。

避光封板密封，37℃暗盒孵育 65min，杜绝光照导致底物分解。

弱光下弃废液，避光洗板液洗板 5 次，每次浸泡 30s，拍干微孔。

全程避光加入显色底物，暗环境显色 17min，不开启环境光源。

避光添加终止液终止反应，快速上机 450nm 读数，计算 LXA4 含量。
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