本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测原理,固相酶标板微孔固定人中期因子特异性抗体,加入标准品和待测生物样本后,样本中的MK抗原与固相抗体特异性免疫结合,洗板去除未结合物质,加入HRP标记的MK检测抗体形成夹心复合物,底物显色深浅与MK含量呈正相关,终止反应后检测OD值,结合标准曲线完成样本中中期因子的定量检测。
基本参数:

产品名称:人中期因子(MK)ELISA试剂盒
英文名称:MK Elisa Kit
货号:Y-E298
规格:48T/96T
灵敏度:检测限 0.13ng/mL
检测范围:0.26ng/mL - 16.64ng/mL
反应时间:一抗温育 36min,二抗 36min,避光显色 14min
保存条件:2-8℃冷藏,标准品分装冻存可延长使用周期
显色系统:稳定型单组份 TMB 底物
检测波长:450nm 单波长读数
标准曲线绘制:剔除极值孔后以线性法绘制标准曲线
注意事项:肿瘤组织样本避免反复冻融超过 2 次,蛋白降解会导致结果偏低
关键注意事项:

本试剂盒仅科研体外检测,严禁临床诊断使用。
全程避免试剂、板条强光直射,TMB 见光易失效。
移液器吸头一次性使用,杜绝交叉污染;所有操作无酶、无热源。
孵育温度严格控制 37℃,温度偏低会降低 OD 值、灵敏度下降。
洗板必须充分,残液会造成非特异性结合,背景偏高。
终止后需快速读数,放置过久吸光度会漂移,结果失真。
终止液含稀硫酸,避免接触皮肤、眼睛,若不慎接触大量清水冲洗。
实验废弃物按生物安全废弃物规范处理。
不同批次试剂盒组分不可混用。
试剂盒运输全程 2~8℃冷链,严禁高温暴晒。
实验步骤如下:

试剂盒室温平衡 30min,梯度稀释 MK 标准品,血清 / 细胞上清样本稀释预处理,标记酶标板各微孔用途。
空白孔添加样本稀释缓冲液,标准品孔加入梯度 MK 标准溶液,样本孔加入待测样本。
直接向全部反应孔加入酶标记抗体工作液,轻摇酶标板混匀孔内液体。
封板密封后置于 37℃湿盒避光孵育 60min,维持稳定孵育温度。
撕开封板倾倒废液,洗板液洗板 4 次,每次浸泡 35s,吸水纸拍干微孔。
避光加入 TMB 显色液,37℃避光显色 14min,显色梯度分明即可终止。
加入终止液终止反应,酶标仪 450nm 检测 OD 值,计算样本 MK 中期因子浓度。
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