人血红蛋白晚期糖基化终末产物(Hb-AGE)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心酶联免疫吸附技术原理，微孔板预先包被人Hb-AGE特异性捕获抗体，加入待测样本与标准品后，体系中的Hb-AGE抗原与固相抗体特异性结合，洗涤清除未结合杂质，再加入辣根过氧化物酶标记的Hb-AGE检测抗体，孵育形成特异性免疫复合物，经洗涤纯化后加入显色底物发生酶促显色反应，终止反应后测定吸光度，依据标准曲线的线性关系，定量检测人体样本中Hb-AGE的含量。
产品参数：

‌灵敏度：检出限 0.15U/mL

检测范围：0.625~40U/mL

反应时间：封闭后样本孵育 80min，二抗 60min，显色 22min，总 162min

保存条件：全套试剂 2~8℃避光，浓缩洗涤液低温会析出结晶，温水溶解后使用

显色系统：OPD 显色系统，硫酸终止

检测波长：492nm 检测，650nm 参比

标准曲线绘制：倍比稀释标准品，直线拟合建立标准曲线

注意事项：糖化样本避免高温处理，会破坏 AGE 抗原结构导致检测失真
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

样本稀释制备：血红蛋白提取液使用样本稀释液按说明书比例稀释，充分涡旋混匀，室温静置 12min；试剂盒整套组分室温平衡 35min。

一步法共加样孵育：各微孔加入标准品溶液、待测样本液及酶标记工作液，封板密封，37℃孵育 60min 进行免疫结合反应。

多次洗板去除未结合物：弃液后加满洗涤液，浸泡 45s 弃去，重复洗板 4 次，彻底拍干微孔内多余液体。

避光底物显色：每孔加入显色底物混合液，水平摇匀，37℃避光显色 16min。

终止反应体系：滴加终止液终止显色，缓慢晃动酶标板使每孔液体混匀。

吸光度检测：酶标仪 450nm 单波长检测每孔 OD 值，逐条记录原始检测数据。

标准曲线定量：依托标准品数据绘制标准曲线，计算样本稀释后浓度，还原稀释倍数得到 Hb-AGE 最终含量，留存检测记录。