人肿瘤坏死因子相关弱凋亡诱导因子(TWEAK)ELISA试剂盒

本试剂盒依托双抗体夹心ELISA核心原理，酶标板微孔包被纯化的人TWEAK特异性捕获抗体，待测样本与标准品中的肿瘤坏死因子相关弱凋亡诱导因子可与固相抗体特异性结合，孵育洗涤后加入酶标记检测抗体形成免疫三元复合物，经TMB底物显色、终止反应后检测OD值，依据标准曲线精准定量样本中TWEAK的浓度。
基本参数‌：

产品名称：人肿瘤坏死因子相关弱凋亡诱导因子(TWEAK)ELISA试剂盒

英文名称：TWEAK ELISA Kit
货号：Y-E2938

规格：48T/96T

灵敏度：最低检出 0.12pg/mL

检测范围：0.24pg/mL - 15.36pg/mL

反应时间：总流程 104min，温育 44min、40min，显色 20min

保存条件：未拆封 2～8℃避光保存，试剂避免温差过大

显色系统：TMB A、B 液等体积混合使用

检测波长：450nm 单波长测定

标准曲线绘制：四参数 Logistic 方程构建标准曲线用于浓度换算

注意事项：凋亡诱导类指标样本避免反复冻融，反复冻融会激活蛋白酶破坏靶蛋白
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

试剂盒室温回温 31min，稀释配制 TWEAK 标准品梯度液，血清样本按比例稀释，划分酶标板孔位用途。

逐孔更换枪头加样，空白孔加稀释缓冲液，标准孔加梯度标准品，样本孔加入稀释血清。

一步法直接加入酶结合抗体工作液至所有微孔，轻拍板侧混匀孔内液体。

封板膜封闭酶标板，37℃恒温避光孵育 65min，避光放置孵育。

撕开封板倒掉废液，洗板液浸泡每孔 33s，连续洗板 5 次并拍干残留洗液。

避光滴加显色底物混合液，室温显色 14min，观察标准品颜色梯度。

终止液终止显色，450nm 检测 OD 值，标准曲线换算 TWEAK 浓度。
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