人重组激活基因2(RAG-2)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，固相酶标板微孔固定人重组激活基因2特异性捕获抗体，待测样本与梯度标准品中的RAG-2抗原可与固相抗体特异性结合，洗板去除游离杂质后，加入酶标记RAG-2检测抗体形成免疫复合物，TMB底物显色后终止反应，检测OD值并拟合标准曲线，精准定量样本中RAG-2蛋白浓度。
基本参数‌：

产品名称：人重组激活基因2(RAG-2)ELISA试剂盒

英文名称：RAG-2 ELISA Kit
货号：Y-E2969

规格：48T/96T

灵敏度：最小检测 0.20pg/mL

检测范围：0.4pg/mL - 25.6pg/mL

反应时间：总时长 100min，温育 42min、38min，显色 20min

保存条件：2～8℃避光密封，标准品分装冻存使用

显色系统：即用型单一 TMB 底物液

检测波长：450nm 单波长读数

标准曲线绘制：线性回归拟合标准曲线，适用于基因表达蛋白定量

注意事项：样本提取过程中添加核酸酶抑制剂，核酸结合会阻碍抗原抗体结合
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂盒室温平衡 27min，梯度稀释 RAG-2 标准品，免疫细胞裂解上清稀释预处理，标记酶标板各微孔用途。

垂直加样至对应微孔，空白孔添加样本稀释液，标准品孔加梯度 RAG-2 标准品，样本孔加入待测裂解上清。

直接向全部反应孔加入酶标记特异性抗体工作液，轻拍酶板混匀体系。

封板膜密封酶标板，37℃恒温避光孵育 68min，单层放置不可堆叠挤压。

弃除孔内废液，洗板液洗板 4 次，每次浸泡 30s，倒扣酶板拍干残留洗液。

避光滴加显色 AB 底物液，37℃避光显色 14min，把控显色深浅防止过曝。

终止液终止显色，酶标仪 450nm 测 OD 值，换算 RAG-2 基因蛋白浓度。
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