人血小板型磷酸果糖激酶(PFKP)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA检测原理，酶标板微孔预先包被人PFKP特异性捕获抗体，加入梯度标准品和待测样本后，样本中的PFKP抗原与固相抗体特异性结合，洗涤清除非特异性结合物质，加入酶标记PFKP检测抗体构建夹心免疫复合物，二次洗涤后加入显色底物显色，终止反应后检测吸光度，结合标准曲线精准定量样本中PFKP的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：检出限 0.05U/L

检测范围：0.156~10U/L

反应时间：样本温育 65min，酶结合物 50min，避光显色 14min，总 129min

保存条件：2~8℃储存，浓缩试剂严禁结冰冻裂瓶体

显色系统：避光 TMB 显色体系

检测波长：450nm 读取 OD

标准曲线绘制：六点位标准品，直线回归计算校准公式

注意事项：酶蛋白对温度敏感，样本离体后尽快低温处理
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

细胞裂解样本稀释：血小板裂解液稀释待测样品，涡旋混匀 15s，室温静置 9min；试剂盒室温复温 30min。

一步加样免疫结合：微孔加入标准品、样本及酶标记试剂，封板 37℃孵育 69min。

多次洗板除杂：洗涤液浸泡 45s，洗板 5 次，彻底拍干微孔残留洗涤液。

避光显色：添加显色液混匀，37℃避光显色 18min。

终止液终止：滴加终止液终止显色反应。

吸光度读取：450nm 检测各孔 OD 值记录原始数据。

定量核算：标准曲线计算样本 PFKP 最终浓度。