人乙胺碘呋酮(AD)ELISA试剂盒

本试剂盒采用竞争法酶联免疫吸附检测原理，微孔板预先包被乙胺碘呋酮固相抗原，加入待测样本、标准品及酶标记抗体，样本中的AD药物分子与固相抗原竞争性结合有限的酶标特异性抗体，孵育平衡后洗涤去除未结合物质，加入显色底物显色，样本中AD含量越高，显色信号越弱，终止反应后检测吸光度，通过标准曲线反向定量计算样本中AD的药物浓度。
产品参数：

‌灵敏度：检出限 0.02μg/mL

检测范围：0.08~5.12μg/mL

反应时间：竞争法样本孵育 80min，酶标二抗 45min，显色 17min，总 142min

保存条件：试剂盒 2~8℃，竞争结合液开封后一次性使用完毕

显色系统：单液 TMB 显色终止

检测波长：450nm 单波长测定

标准曲线绘制：竞争抑制模式，五参数拟合标准曲线

注意事项：药物体内代谢产物会发生交叉反应，需结合临床用药史判读
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

血清药物样本稀释：服药后血清样本稀释混匀，室温静置 9min；整套试剂盒室温复温 30min。

一步共加样免疫孵育：各孔加入标准品、待测血清与酶结合试剂，封板 37℃孵育 62min。

洗涤微孔：弃液洗涤浸泡 35s，洗板 5 次，吸水纸拍干微孔残留液体。

避光显色：添加显色双液震荡混匀，37℃避光显色 16min。

终止显色：加入终止液终止酶促反应。

光度检测：450nm 波长测定 OD 值逐条记录。

血药浓度换算：标准曲线计算稀释后 AD 浓度，还原稀释倍率得到血药含量。