猪瘟病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
使用说明书
【产品名称】
通用名：猪瘟病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Classical Swine Fever Virus （ELISA）
【包装规格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒
【预期用途】 猪瘟是由猪瘟病毒（Classical Swine Fever Virus，CSFV）引起的猪的一种高度接触性、出血性和致死性传染病，其特征为高热稽留和微血管壁变性而引起的广泛出血、坏死、梗塞等，慢性以纤维素坏死性肠炎为特征。
本试剂用于检测猪血清中猪瘟病毒抗体，可用于猪瘟病毒疫苗免疫效果评价。
【原 理】
本试剂盒由预包被猪瘟病毒重组E2蛋白的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测猪血清、血浆样本中猪瘟病毒抗体。实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本，经温育后若样品中含有猪瘟病毒抗体，则将与酶标板上抗原结合，经洗涤除去未结合的其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加TMB底物液，与酶标结合物反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有猪瘟病毒抗体。
【试剂盒组成】
序号 | 名称 | 规格/96T×1 | 规格/96T×2 | 规格/96T×5 |
1 | 酶标记物 | 11ml×1(红盖) | 11ml×2(红盖) | 26ml×2(红盖) |
2 | 样品稀释液 | 50ml×1(黄盖) | 50ml×1(黄盖) | 200ml×1(透明) |
3 | 20X浓缩洗涤液 | 40ml×1(白盖) | 40ml×1(白盖) | 200ml×1(透明) |
4 | 底物液A | 6ml×1(白盖) | 11ml×1(白盖) | 26ml×1(白盖) |
5 | 底物液B | 6ml×1(黑盖) | 11ml×1(棕盖) | 26ml×1(黑盖) |
6 | 终止液 | 6ml×1(黄盖) | 11ml×1(黄盖) | 26ml×1(黄盖) |
7 | 阳性对照 | 1.0 ml×1(红盖) | 1.5 ml×1(红盖) | 2.0 ml×1(红盖) |
8 | 阴性对照 | 1.0 ml×1(绿盖) | 1.5 ml×1(绿盖) | 2.0 ml×1(绿盖) |
9 | 酶标板 | 96T×1 | 96T×2 | 96T×5 |
10 | 盖板膜 | 1 | 2 | 5 |
11 | 自封袋 | 1 | 1 | 2 |
12 | 说明书 | 1 | 1 | 1 |
13 | 稀释板 | 1 | 2 | 5 |
【储存及有效期】2～8℃保存，有效期12个月。
包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为2个月。
【适用仪器】 含450nm、630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。
【样品准备】
1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。
2.用样品稀释液将待检血清按40倍稀释（如5μl血清加入195μl样品稀释液中，混匀）。阴、阳性对照不用稀释。
3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释成工作洗涤液(如19份蒸馏水或去离子水+1份浓缩洗涤液)。
【检验方法】
1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。
2.取所需用量酶标板条，设阴性/阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。
3.阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl；样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。
4.混匀，盖好盖板膜，置37℃（推荐水浴）避光反应30分钟。
5.甩去孔内液体，每孔加350μl工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，最后一次拍干。
6.每孔加酶标记物100μl，盖好盖板膜，置37℃避光反应30分钟。
7.洗涤，同步骤5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，盖好盖板膜，置37℃避光反应10分钟。
9.每孔加终止液50μl，混匀，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值。
【参考值】 实验正常的情况下，阴性对照的平均OD值即ODNC应≤0.3，阳性对照的平均OD值即ODPC应≥0.6。
【检验结果的判定】
1.样品的OD值即ODS；
2.阈值计算：SP值=（ODS-ODNC）/（ODPC-ODNC）；
SP值≥0.2，结果判定为阳性；SP值＜0.2，结果判定为阴性。
3.本实验结果为阴性时表明猪只抗体水平不足，建议补打相应疫苗。
【试验方法的局限性】
该试验仅作为定性检测猪血清、血浆中猪瘟病毒抗体，根据SP值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估。
【注意事项】
1.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。
2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。
3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。
4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以完全溶解。
5.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。
6.用于检测的样品应保持新鲜。
7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。
8.不同批号试剂组分不得混用。
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上海雅吉生物科技的核心业务主要围绕生命科学研究所需的各类试剂、细胞、抗体及技术服务展开，具体可归纳为以下几个方面：
细胞产品与技术平台：
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ELISA试剂盒：提供人、大鼠、小鼠、犬、鱼、鸡、牛等多种物种以及植物的ELISA检测试剂盒，在国内众多重点实验室中广泛使用并被科研文献引用。生化试剂、抗体与血清：提供包括一抗、二抗、单克隆/多克隆抗体在内的多种抗体产品，以及胎牛血清等细胞培养用血清。
蛋白研究相关试剂盒：提供超过300种针对不同样本来源（动物、植物、微生物）和不同细胞器（如线粒体、外泌体）的蛋白提取及检测试剂盒。