本试剂盒针对猪生殖与呼吸综合症病毒美洲株专属保守基因设计特异性扩增体系,可精准定性检测美洲株病毒核酸,特异性排除欧洲株及其他猪疫病病毒干扰,毒株分型准确率高。试剂盒反应体系稳定,检测速度快,可实现样本快速批量检测,适配规模化猪场常态化筛查需求。适用于国内主流美洲株蓝耳病的临床确诊、猪群隐性感染排查、猪场疫病净化、疫苗免疫效果监测及病原流行病学调研。
产品名称 | 猪生殖与呼吸综合症病毒美洲株PCR检测试剂盒 | 货号 | YS-P014618 |
英文名称 | Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus North America Strain(PRRSV NA) RTPCR | 规格 | 50T |
有效期 | 12个月 | 保存 | -20℃保存 |
基础原理:

对猪血液、精液样本进行核酸提取,去除血液中血红蛋白等抑制成分后反转录 RNA。
探针识别美洲株独有基因片段,不会与欧洲株序列发生杂交结合。
荧光扩增曲线出现有效上升信号即可判定美洲株感染,为毒株分型提供依据。
操作步骤:

DNA提取(样本制备区)
使用自选方法或兼容的核酸提取试剂盒纯化样本DNA,确保无抑制剂残留。
标准曲线制备(样本制备区)
标记6支离心管为7至2号,每管加入45 μL DEPC-H2O(需使用带滤芯枪头)。
梯度稀释阳性对照:
7号管:加入5 μL 1×10^8拷贝/μL阳性对照,震荡混匀,得1×10^7拷贝/μL标准品;
依次稀释至2号管,最终浓度跨5个数量级(1×10^7至1×10^3拷贝/μL)。
所有标准品置于冰上备用,避免反复冻融。
试剂配制(试剂准备区)
反应液避光解冻后涡旋混匀,短暂离心分装至PCR管。
每反应体系20 μL,含预混引物、荧光染料及缓冲液。
加样(样本处理区)
分别加入5 μL待测DNA或标准品至反应管,阴性对照以DEPC-H2O替代。
盖紧管盖,避免气泡干扰。
PCR扩增(核酸扩增区)
按以下程序运行定量PCR仪:
预变性:95℃ 2分钟;
循环阶段(40次):95℃ 15秒 → 60℃ 30秒(采集荧光信号);
熔解曲线分析(可选)。
注意事项:

试剂盒含生物源性质粒模板,操作全程佩戴手套、口罩,阳性模板仅在生物安全柜开盖;
所有一次性耗材、PCR 废液、电泳凝胶实验后 121℃高压灭菌再丢弃;
试剂避免反复冻融,单次融化冰上放置不超过 2 h,使用完毕立即放回 - 20℃;
移液器吸头一次性使用,禁止重复吸取,防止交叉污染;
试剂盒仅用于科研检测,严禁人临床体外诊断;
扩增产物区产物不可带回试剂、提取区,防止气溶胶大面积污染实验室;
若阴性对照持续出现杂带,全部更换全新试剂盒,实验室台面、移液器紫外过夜消毒。
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关键字: 猪生殖与呼吸综合症病毒美洲株;PCR检测试剂盒;
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