本试剂盒采用通用型引物设计，可广谱覆盖猪轮状病毒各亚型毒株核酸检测，突破亚型限制，实现一株多检的快速筛查效果。产品检测灵敏度高，可精准识别轻症、隐性感染样本，反应体系稳定，适配各类猪临床腹泻样本。主要用于猪轮状病毒各类亚型感染的全面排查、散发病例确诊、猪场病毒净化及轮状病毒病原变异监测与科研分析。
产品名称 | 猪轮状病毒通用PCR检测试剂盒 | 货号 | YS-P014622 |
英文名称 | Porcine rotavirus RTPCR | 规格 | 50T |
有效期 | 12个月 | 保存 | -20℃保存 |
基础原理：
裂解粪便样本释放轮状病毒核酸，去除肠道菌群干扰物质后反转录 RNA。
选用轮状病毒全毒株高度保守基因片段设计引物，覆盖不同亚型轮状病毒。
通过荧光扩增结果定性样本是否存在轮状病毒，不细分具体群别，适合快速初筛。
操作步骤：
1. DNA提取（样本制备区）
使用自选方法或兼容试剂盒提取样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL，A260/A280比值1.8-2.0。
2. 标准曲线制备（独立操作区）
标记6管为梯度稀释点（如7-2），每管加45 μL DEPC水。
取5 μL阳性对照依次稀释，混匀后作为标准品（避免污染）。
3. PCR反应体系配制（试剂配制区）
按以下比例配制（示例）：
| 组分 | 体积（μL） |
| 2× Master Mix | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| DNA模板 | 2 |
| DEPC水 | 6 |
4. 上机检测
程序设置：预变性95℃ 3 min；40循环（95℃ 10 s, 60℃ 30 s）；熔解曲线分析。
数据分析：根据Ct值及标准曲线计算样本浓度。
注意事项：
试剂盒含生物源性质粒模板，操作全程佩戴手套、口罩，阳性模板仅在生物安全柜开盖；
所有一次性耗材、PCR 废液、电泳凝胶实验后 121℃高压灭菌再丢弃；
试剂避免反复冻融，单次融化冰上放置不超过 2 h，使用完毕立即放回 - 20℃；
移液器吸头一次性使用，禁止重复吸取，防止交叉污染；
试剂盒仅用于科研检测，严禁人临床体外诊断；
扩增产物区产物不可带回试剂、提取区，防止气溶胶大面积污染实验室；
若阴性对照持续出现杂带，全部更换全新试剂盒，实验室台面、移液器紫外过夜消毒。
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