猪传染性腹泻病毒PCR检测试剂盒

本检测配套体系基于PCR扩增核心技术，针对猪传染性腹泻病毒特征保守核酸序列设计特异性检测引物，可精准检测生猪样本中的病毒核酸，快速鉴别猪传染性腹泻疫病，有效区分轮状病毒、札如病毒等其他致泻病原。体系操作简便、检测快速，可适配猪粪便、肠道组织、肠内容物等样本，灵敏度高，可实现早期隐性感染筛查。主要应用于规模化猪场传染性腹泻疫病快速诊断、疫情暴发溯源、猪群疫病净化及养殖生产中的疫病风险防控。

基础原理：

采集仔猪肠道黏膜、粪便样本，裂解病毒颗粒提取 RNA 并进行逆转录。

引物靶向猪传染性腹泻病毒 N 核蛋白基因，序列特异性强，不与其他腹泻冠状病毒交叉扩增。

依靠实时荧光 PCR 扩增曲线判定阳性，快速确诊病毒性腹泻病原。

‌操作步骤‌：

DNA提取（样本制备区）

使用自选方法或兼容的核酸提取试剂盒纯化样本DNA，确保无抑制剂残留。

标准曲线制备（样本制备区）

标记6支离心管为7至2号，每管加入45 μL DEPC-H2O（需使用带滤芯枪头）。

梯度稀释阳性对照：

7号管：加入5 μL 1×10^8拷贝/μL阳性对照，震荡混匀，得1×10^7拷贝/μL标准品；

依次稀释至2号管，最终浓度跨5个数量级（1×10^7至1×10^3拷贝/μL）。

所有标准品置于冰上备用，避免反复冻融。

试剂配制（试剂准备区）

反应液避光解冻后涡旋混匀，短暂离心分装至PCR管。

每反应体系20 μL，含预混引物、荧光染料及缓冲液。

加样（样本处理区）

分别加入5 μL待测DNA或标准品至反应管，阴性对照以DEPC-H2O替代。

盖紧管盖，避免气泡干扰。

PCR扩增（核酸扩增区）

按以下程序运行定量PCR仪：

预变性：95℃ 2分钟；

循环阶段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

熔解曲线分析（可选）。

‌注意事项‌：

所有试剂避免反复冻融，可分装小体积冻存；融化后冰上放置不超过 2 h，酶失活会直接导致无扩增条带

阳性质粒拷贝数极高，开盖全程在生物安全柜操作，防止气溶胶污染实验室

所有耗材必须无核酸酶，枪头一次性使用；实验后 PCR 管、废液 121℃高压灭菌后丢弃

试剂盒出现浑浊、变色、结冰分层、过期禁止使用

仅限科研检测，严禁用于人体临床疾病诊断、食品出厂检疫等合规检测场景

土壤、粪便、腐殖质样本优先使用磁珠法提取核酸，减少抑制剂干扰

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