产品名称:豚鼠耳炎诺卡菌PCR检测试剂盒
英文名称:Nocardia otitidiscaviarumPCR
货号:YS-P014518
分类:PCR检测试剂盒
规格:50T/盒
检测原理:对样本进行菌体裂解与核酸提纯,去除组织碎屑,获取豚鼠耳炎诺卡菌 DNA 模板。
引物序列仅能互补配对豚鼠耳炎诺卡菌的保守基因,保证检测的菌种特异性。
利用 PCR 技术放大低浓度病原核酸信号,实现该诺卡菌的快速分子检测。实验流程:1. 样本处理
提取待测样本RNA,建议使用商品化RNA提取试剂盒。
2. 阳性对照稀释(示例:6个梯度)
标记离心管(7至2号),每管加入45μL模板稀释液。
按10倍梯度稀释阳性对照,避免交叉污染。
3. PCR反应体系配制(20μL/反应)
| 组分 | 体积(μL) |
| RT-PCR反应液 | 10 |
| 荧光染料 | 0.5 |
| 引物混合液 | 2 |
| RNA模板 | 2 |
| RNase-free水 | 补至20 |
4. 上机程序
逆转录:50℃ 15分钟(可选,根据病毒RNA特性调整)。
预变性:95℃ 2分钟。
循环:95℃ 15秒 → 60℃ 30秒(采集荧光信号),共40循环。
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注意事项:1、实验分区管理
实验全程需严格划分三个独立区域:试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区,各区实验服、移液器及耗材严禁混用,防止交叉污染。
2、防止污染操作
使用带滤芯枪头,每步更换枪头;
阳性对照操作应在专用生物安全柜中进行,避免污染其他试剂;
加样后立即盖紧管盖,避免气溶胶扩散。
3、试剂保存与使用
所有试剂需-20℃避光保存,避免反复冻融,确保稳定性;
使用前于冰上解冻并轻柔混匀,瞬时离心后使用。
上海研生实业有限公司
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