产品名称:猴型逆转录病毒PCR检测试剂盒
英文名称:Simian TypeD Retrovirus(SRV)DPCR
货号:YS-P014752
分类:PCR检测试剂盒
规格:50T/盒
检测原理:
选取猴型逆转录病毒特有逆转录酶编码基因作为扩增靶位点。
将样本病毒 RNA 反转录为 cDNA 后,通过热循环扩增病毒核酸片段。
根据扩增信号结果筛查猴群逆转录病毒携带情况。
实验流程:
样本制备:
使用CTAB法或商业DNA提取试剂盒从组织中提取基因组DNA。
建议DNA浓度≥20 ng/μL,A260/A280比值1.8~2.0。
反应体系配制(20 μL体系示例):
预混PCR Master Mix(含染料、dNTPs、Taq酶等)
特异性引物混合液
模板DNA(2~5 μL)
补充无核酸酶水至终体积。
PCR扩增程序:
预变性:95℃ 5分钟;
循环阶段(40~45 cycles):95℃ 10秒 → 60℃ 30秒(采集荧光信号);
熔解曲线分析:60~95℃(可选,用于验证扩增特异性)。
结果判读:
阳性:Ct值≤35且熔解曲线峰单一;
阴性:Ct值≥40或无扩增曲线;
可疑:35<Ct值<40,建议复测或结合熔解曲线分析。
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注意事项:
分区操作:试剂配制、样品处理、PCR扩增需在独立区域进行,避免交叉污染
无菌操作:使用带滤芯枪头、一次性手套和专用工作服
试剂准备:所有试剂使用前需完全融化,震荡混匀后短暂离心
避光保存:含荧光探针的试剂需避光保存和操作
防止污染:阳性对照操作需最后进行,实验后用10%次氯酸或75%酒精消毒工作台
关键字: 猴型逆转录病毒;PCR检测试剂盒;
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