本试剂盒基于特异性PCR扩增技术，针对滴虫属微生物的高度保守核酸序列设计特异性引物，可精准检出各类常见滴虫病原核酸，有效覆盖不同滴虫菌种的检测需求。产品特异性强，不会与其他寄生原虫、细菌、真菌等常见病原发生交叉反应，检测灵敏度高，能够快速完成临床样本、动物样本中的滴虫病原筛查与辅助确诊，适用于临床检验、动物疫病监测及流行病学调查等场景，操作简便、检测周期短，可高效适配批量样本检测工作。
产品名称 | 滴虫通用PCR检测试剂盒 | 货号 | YS-P014861 |
英文名称 | Trichomonas spp.PCR | 规格 | 50T |
有效期 | 12个月 | 保存 | -20℃保存 |
基础原理：
试剂盒内含有针对滴虫属保守基因区段设计的特异性上下游引物，可对样本中滴虫核酸片段进行特异性扩增。
通过 Taq DNA 聚合酶在 PCR 循环中完成变性、退火、延伸三步反应，使目标核酸片段呈指数级大量复制。
扩增产物可结合电泳或荧光信号判定，若出现对应大小目的条带 / 荧光信号，即可证明样本存在滴虫核酸。
操作步骤：
（一）反应体系配制（冰上操作，防酶失活与污染）
按 “水→缓冲液→dNTP→引物→模板→Taq 酶” 顺序加样（酶最后加，避免失活）。
轻轻涡旋混匀，短暂离心（3000rpm，10s），使液体沉至管底。
无热盖的 PCR 仪：加 1 滴矿物油覆盖液面，防止蒸发。
（二）PCR 程序设置（标准 35 循环）
预变性：94℃，3-5min（彻底变性模板 DNA）。
循环阶段（35 次）：
变性：94℃，30s（双链解链）。
退火：55-65℃，30s（引物结合模板，按引物 Tm 值调整）。
延伸：72℃，1min/kb（Taq 酶合成新链，1kb 片段约 1min）。
终延伸：72℃，5-10min（确保片段完整延伸）。
保温：4℃，∞（防止非特异性复性，短期保存）。
（三）产物检测（琼脂糖凝胶电泳）
制胶：1% 琼脂糖凝胶（1g 琼脂糖 + 100mL 1×TAE 缓冲液），加热融化后加核酸染料，倒胶插梳，凝固 30min。
上样：取 5μL PCR 产物 + 1μL 上样缓冲液，点样；同时加 DNA Marker（分子量对照）。
电泳：120V，20-30min，至溴酚蓝迁移至凝胶 2/3 处。
成像：凝胶成像系统观察条带，目标片段位置与预期一致则为阳性。
四、参数优化
退火温度（Tm）：引物 Tm 值 = 4×(G+C)+2×(A+T)，退火温度一般低于 Tm 值 5℃，温度过高无条带，过低非特异性条带多。
Mg²⁺浓度：1.5-2.5mM，浓度过低酶活性低、产量少；过高非特异性扩增增加。
循环数：25-35 个循环，少于 25 个产物不足，多于 35 个易出现非特异性条带。
延伸时间：按目标片段长度调整，≤1kb 用 1min，1-3kb 用 2-3min。
注意事项：
试剂禁止反复冻融，分装为小体积 - 20℃保存，融化后冰上放置不超过 2 h
所有耗材必须无 DNase/RNase，吸头一次性使用，废液、废弃 PCR 管 121℃高压灭菌后丢弃
阳性质粒高拷贝，开盖全程在生物安全柜操作，防止气溶胶污染实验室
试剂盒仅限科研检测，禁止人、临床样本检测
试剂盒过期、试剂浑浊、变色禁止使用
若大量样本出现阴性对照带污染，立即更换全新试剂盒，彻底紫外消毒实验台面、移液器
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