本试剂盒为荧光定量PCR检测产品，可实时监测霍乱弧菌核酸扩增过程，不仅能定性判定菌株存在，还可精准定量检测病原载量。检测灵敏度更高、结果重复性好、抗干扰能力强，可检出微量低载量病原，适用于霍乱早期隐匿感染筛查、环境微量污染监测、治疗效果动态评估及疫情精准防控。
产品名称 | 霍乱弧菌荧光PCR检测试剂盒 | 货号 | YS-P015059 |
英文名称 | Vibrio cholerae Fluorescent PCR Detection Kit | 规格 | 50T |
有效期 | 12个月 | 保存 | -20℃保存 |
基础原理：
搭配 TaqMan 特异性探针，探针仅结合霍乱弧菌靶基因，扩增时释放荧光实现实时检测。
可通过 Ct 值快速判定样本阴阳性，相较于普通凝胶电泳检测速度更快。
封闭管内扩增检测，无需开盖电泳，大幅降低实验室核酸气溶胶污染风险。
操作步骤：
DNA提取（样本制备区）
使用自选方法或兼容的核酸提取试剂盒纯化样本DNA，确保无抑制剂残留。
标准曲线制备（样本制备区）
标记6支离心管为7至2号，每管加入45 μL DEPC-H2O（需使用带滤芯枪头）。
梯度稀释阳性对照：
7号管：加入5 μL 1×10^8拷贝/μL阳性对照，震荡混匀，得1×10^7拷贝/μL标准品；
依次稀释至2号管，最终浓度跨5个数量级（1×10^7至1×10^3拷贝/μL）。
所有标准品置于冰上备用，避免反复冻融。
试剂配制（试剂准备区）
反应液避光解冻后涡旋混匀，短暂离心分装至PCR管。
每反应体系20 μL，含预混引物、荧光染料及缓冲液。
加样（样本处理区）
分别加入5 μL待测DNA或标准品至反应管，阴性对照以DEPC-H2O替代。
盖紧管盖，避免气泡干扰。
PCR扩增（核酸扩增区）
按以下程序运行定量PCR仪：
预变性：95℃ 2分钟；
循环阶段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；
熔解曲线分析（可选）。
注意事项：
分区操作：试剂配制、样品处理、PCR扩增需在独立区域进行，避免交叉污染
无菌操作：使用带滤芯枪头、一次性手套和专用工作服
试剂准备：所有试剂使用前需完全融化，震荡混匀后短暂离心
避光保存：含荧光探针的试剂需避光保存和操作
防止污染：阳性对照操作需最后进行，实验后用10%次氯酸或75%酒精消毒工作台
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