本试剂盒针对兔黏液瘤病毒特异性基因序列研发PCR检测体系,是兔类专属疫病检测产品,可精准检测兔体组织、皮肤病灶、分泌物样本中的病毒核酸。试剂盒特异性强,无兔源其他病毒交叉反应,检测速度快、准确率高,可用于兔养殖场日常疫病筛查、种兔引种检疫、黏液瘤疫情排查及动物疫病科研工作。
产品名称 | 兔黏液瘤病毒PCR检测试剂盒 | 货号 | YS-P015265 |
英文名称 | Rabbit Myxoma Virus PCR Detection Kit | 规格 | 50T |
有效期 | 12个月 | 保存 | -20℃保存 |
基础原理:

病兔瘤肿组织、皮肤痂皮提取病毒双链 DNA,清除兔宿主基因组干扰。
引物靶向病毒肿瘤形成相关保守基因,仅扩增黏液瘤病毒核酸。
电泳阳性条带判定兔黏液瘤病毒感染。
操作步骤:

(一)反应体系配制(冰上操作,防酶失活与污染)
按 “水→缓冲液→dNTP→引物→模板→Taq 酶” 顺序加样(酶最后加,避免失活)。
轻轻涡旋混匀,短暂离心(3000rpm,10s),使液体沉至管底。
无热盖的 PCR 仪:加 1 滴矿物油覆盖液面,防止蒸发。
(二)PCR 程序设置(标准 35 循环)
预变性:94℃,3-5min(彻底变性模板 DNA)。
循环阶段(35 次):
变性:94℃,30s(双链解链)。
退火:55-65℃,30s(引物结合模板,按引物 Tm 值调整)。
延伸:72℃,1min/kb(Taq 酶合成新链,1kb 片段约 1min)。
终延伸:72℃,5-10min(确保片段完整延伸)。
保温:4℃,∞(防止非特异性复性,短期保存)。
(三)产物检测(琼脂糖凝胶电泳)
制胶:1% 琼脂糖凝胶(1g 琼脂糖 + 100mL 1×TAE 缓冲液),加热融化后加核酸染料,倒胶插梳,凝固 30min。
上样:取 5μL PCR 产物 + 1μL 上样缓冲液,点样;同时加 DNA Marker(分子量对照)。
电泳:120V,20-30min,至溴酚蓝迁移至凝胶 2/3 处。
成像:凝胶成像系统观察条带,目标片段位置与预期一致则为阳性。
四、参数优化
退火温度(Tm):引物 Tm 值 = 4×(G+C)+2×(A+T),退火温度一般低于 Tm 值 5℃,温度过高无条带,过低非特异性条带多。
Mg²⁺浓度:1.5-2.5mM,浓度过低酶活性低、产量少;过高非特异性扩增增加。
循环数:25-35 个循环,少于 25 个产物不足,多于 35 个易出现非特异性条带。
延伸时间:按目标片段长度调整,≤1kb 用 1min,1-3kb 用 2-3min。
注意事项:

试剂禁止反复冻融,分装为小体积 - 20℃保存,融化后冰上放置不超过 2 h
所有耗材必须无 DNase/RNase,吸头一次性使用,废液、废弃 PCR 管 121℃高压灭菌后丢弃
阳性质粒高拷贝,开盖全程在生物安全柜操作,防止气溶胶污染实验室
试剂盒仅限科研检测,禁止人、临床样本检测
试剂盒过期、试剂浑浊、变色禁止使用
若大量样本出现阴性对照带污染,立即更换全新试剂盒,彻底紫外消毒实验台面、移液器
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