本试剂盒靶向豌豆固有内源保守基因设计PCR扩增体系，主要作为豌豆样本分子检测的内参质控试剂，用于校验豌豆核酸提取纯度与PCR扩增体系的有效性。试剂盒扩增稳定性强、特异性单一，仅识别豌豆内源基因，无其他植物基因干扰，适配豌豆转基因检测、品种鉴定、食材溯源、分子生物学实验的内参对照检测。
产品名称 | 豌豆内源基因PCR检测试剂盒 | 货号 | YS-P015267 |
英文名称 | Pea Endogenous Gene PCR Detection Kit | 规格 | 50T |
有效期 | 12个月 | 保存 | -20℃保存 |
基础原理：
豌豆种子、植株组织提取植物 DNA，内源基因作为核酸提取质控参照。
引物为豌豆物种特有管家基因，所有纯合豌豆样本均可稳定扩增。
无内源条带代表提取失效，不可进行后续转基因外源基因检测。
操作步骤：
样本制备：
使用CTAB法或商业DNA提取试剂盒从组织中提取基因组DNA。
建议DNA浓度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。
反应体系配制（20 μL体系示例）：
预混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）
特异性引物混合液
模板DNA（2~5 μL）
补充无核酸酶水至终体积。
PCR扩增程序：
预变性：95℃ 5分钟；
循环阶段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；
熔解曲线分析：60~95℃（可选，用于验证扩增特异性）。
结果判读：
阳性：Ct值≤35且熔解曲线峰单一；
阴性：Ct值≥40或无扩增曲线；
可疑：35<Ct值<40，建议复测或结合熔解曲线分析。
注意事项：
1、实验分区管理
实验全程需严格划分三个独立区域：试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区，各区实验服、移液器及耗材严禁混用，防止交叉污染。
2、防止污染操作
使用带滤芯枪头，每步更换枪头；
阳性对照操作应在专用生物安全柜中进行，避免污染其他试剂；
加样后立即盖紧管盖，避免气溶胶扩散。
3、试剂保存与使用
所有试剂需-20℃避光保存，避免反复冻融，确保稳定性；
使用前于冰上解冻并轻柔混匀，瞬时离心后使用。
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