产品名称：犬钩端螺旋体PCR检测试剂盒
英文名称：Canine Leptospira PCR Detection Kit
货号：YS-P015185
分类：PCR检测试剂盒
规格：50T/盒
检测原理：
裂解犬尿液、血清样本释放钩体 DNA，靶向 lipL32 保守基因进行 PCR 扩增，特异性条带出现证明样本含钩端螺旋体核酸。
荧光定量 PCR 探针匹配钩体管家基因，扩增产生荧光信号，可区分致病性与非致病钩端螺旋体菌株。
试剂盒缓冲液消除尿液中尿素、盐离子抑制剂干扰，仅钩体基因组可与引物互补配对完成核酸扩增反应。
实验流程：
1. DNA提取（样本制备区）
使用自选方法或兼容试剂盒提取样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL，A260/A280比值1.8-2.0。
2. 标准曲线制备（独立操作区）
标记6管为梯度稀释点（如7-2），每管加45 μL DEPC水。
取5 μL阳性对照依次稀释，混匀后作为标准品（避免污染）。
3. PCR反应体系配制（试剂配制区）
按以下比例配制（示例）：
| 组分 | 体积（μL） |
| 2× Master Mix | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| DNA模板 | 2 |
| DEPC水 | 6 |
4. 上机检测
程序设置：预变性95℃ 3 min；40循环（95℃ 10 s, 60℃ 30 s）；熔解曲线分析。
数据分析：根据Ct值及标准曲线计算样本浓度。
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注意事项：
所有试剂避免反复冻融，可分装小体积冻存；融化后冰上放置不超过 2 h，酶失活会直接导致无扩增条带
阳性质粒拷贝数极高，开盖全程在生物安全柜操作，防止气溶胶污染实验室
所有耗材必须无核酸酶，枪头一次性使用；实验后 PCR 管、废液 121℃高压灭菌后丢弃
试剂盒出现浑浊、变色、结冰分层、过期禁止使用
仅限科研检测，严禁用于人体临床疾病诊断、食品出厂检疫等合规检测场景
土壤、粪便、腐殖质样本优先使用磁珠法提取核酸，减少抑制剂干扰
关键字： 犬钩端螺旋体;PCR检测试剂盒;
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