本试剂盒靶向志贺菌高度保守的ipaH毒力基因特定bp片段设计常规PCR扩增体系，可精准检测样本中致病性志贺菌的特异性基因片段。试剂盒靶点精准、特异性极强，可稳定扩增目标基因片段，区分志贺菌与其他肠道致病菌，检测结果精准、重复性好，适用于食品、水源、临床样本中志贺菌的精准定性检测，是细菌性痢疾溯源、食源性疾病防控的专用检测试剂。
产品名称 | 志贺菌ipaH 基因(bp)常规PCR检测试剂盒 | 货号 | YS-P015324 |
英文名称 | Conventional PCR Detection Kit for ipaH Gene (bp) of Shigella | 规格 | 50T |
有效期 | 12个月 | 保存 | -20℃保存 |
基础原理：
裂解粪便样本志贺菌菌体，提纯基因组 DNA，去除肠道杂质干扰。
引物靶向 ipaH 毒力保守基因，扩增固定 bp 长度特征核酸片段。
电泳比对片段分子量，匹配设定 bp 条带即为致病性志贺菌阳性。
操作步骤：
样本制备：
使用CTAB法或商业DNA提取试剂盒从组织中提取基因组DNA。
建议DNA浓度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。
反应体系配制（20 μL体系示例）：
预混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）
特异性引物混合液
模板DNA（2~5 μL）
补充无核酸酶水至终体积。
PCR扩增程序：
预变性：95℃ 5分钟；
循环阶段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；
熔解曲线分析：60~95℃（可选，用于验证扩增特异性）。
结果判读：
阳性：Ct值≤35且熔解曲线峰单一；
阴性：Ct值≥40或无扩增曲线；
可疑：35<Ct值<40，建议复测或结合熔解曲线分析。
注意事项：
分区操作：试剂配制、样品处理、PCR扩增需在独立区域进行，避免交叉污染
无菌操作：使用带滤芯枪头、一次性手套和专用工作服
试剂准备：所有试剂使用前需完全融化，震荡混匀后短暂离心
避光保存：含荧光探针的试剂需避光保存和操作
防止污染：阳性对照操作需最后进行，实验后用10%次氯酸或75%酒精消毒工作台
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