产品名称:猪蓝耳病病毒通用型(PRRSV-U)核酸检测试剂盒
英文名称:Universal Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus (PRRSV-U) Nucleic Acid Detection Kit
货号:YS-P015415
分类:核酸检测试剂盒
规格:50T/盒
检测原理:
ORF7 核衣壳蛋白基因通用荧光 RT-qPCR,覆盖经典株、高致病株、欧洲株所有 PRRSV 毒株,靶基因高度保守,单一引物探针组合实现全毒株通用筛查。
一步反转录等温荧光扩增原理,恒温条件下完成病毒 RNA 反转录与 DNA 扩增,依靠嵌入染料产生荧光,无需精密定量 PCR 设备,基层现场筛查。
宿主基因组内参校正 RT-PCR,以猪 GAPDH 基因为内参,校正血清、肺脏样本中血红蛋白、蛋白杂质对反转录扩增的抑制,减少假阴性。
实验流程:
DNA提取(样本制备区)
使用自选方法或兼容的核酸提取试剂盒纯化样本DNA,确保无抑制剂残留。
标准曲线制备(样本制备区)
标记6支离心管为7至2号,每管加入45 μL DEPC-H2O(需使用带滤芯枪头)。
梯度稀释阳性对照:
7号管:加入5 μL 1×10^8拷贝/μL阳性对照,震荡混匀,得1×10^7拷贝/μL标准品;
依次稀释至2号管,最终浓度跨5个数量级(1×10^7至1×10^3拷贝/μL)。
所有标准品置于冰上备用,避免反复冻融。
试剂配制(试剂准备区)
反应液避光解冻后涡旋混匀,短暂离心分装至PCR管。
每反应体系20 μL,含预混引物、荧光染料及缓冲液。
加样(样本处理区)
分别加入5 μL待测DNA或标准品至反应管,阴性对照以DEPC-H2O替代。
盖紧管盖,避免气泡干扰。
PCR扩增(核酸扩增区)
按以下程序运行定量PCR仪:
预变性:95℃ 2分钟;
循环阶段(40次):95℃ 15秒 → 60℃ 30秒(采集荧光信号);
熔解曲线分析(可选)。
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注意事项:
分区操作:试剂配制、样品处理、PCR扩增需在独立区域进行,避免交叉污染
无菌操作:使用带滤芯枪头、一次性手套和专用工作服
试剂准备:所有试剂使用前需完全融化,震荡混匀后短暂离心
避光保存:含荧光探针的试剂需避光保存和操作
防止污染:阳性对照操作需最后进行,实验后用10%次氯酸或75%酒精消毒工作台
关键字: 猪蓝耳病病毒通用型;PRRSV-U;核酸检测试剂盒;
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