本试剂盒为双重联合检测试剂，可同时定性检测猪圆环病毒、猪伪狂犬病毒两大高发猪病病毒核酸。两种病毒靶点无交叉干扰，检测体系稳定高效，可同步排查两种病毒单一感染及混合感染情况，适用于生猪养殖疫病诊断、临床病料检测、猪场净化筛查、畜禽疫病常态化监测。
产品名称 | 猪圆环病毒/伪狂犬病毒(PCV/PRV)核酸检测试剂盒 | 货号 | YS-P015615 |
英文名称 | Porcine Circovirus / Pseudorabies Virus (PCV/PRV) Nucleic Acid Detection Kit | 规格 | 50T |
有效期 | 12个月 | 保存 | -20℃保存 |
基础原理：
分别设计猪圆环病毒、伪狂犬病毒特异性引物探针，通过双重实时荧光PCR技术同步扩增两种病毒核酸，实现两种猪病毒病的联合检测。
两种病毒靶标序列差异显著，探针采用不同荧光标记，扩增信号相互独立，可同时识别两种病毒核酸，无交叉干扰，检测特异性强。
纯化样本病毒核酸后，通过双重PCR体系同步放大两种病毒微量核酸信号，结合荧光扩增曲线，快速判定样本是否存在单一或混合病毒感染。
操作步骤：
（一）反应体系配制（冰上操作，防酶失活与污染）
按 “水→缓冲液→dNTP→引物→模板→Taq 酶” 顺序加样（酶最后加，避免失活）。
轻轻涡旋混匀，短暂离心（3000rpm，10s），使液体沉至管底。
无热盖的 PCR 仪：加 1 滴矿物油覆盖液面，防止蒸发。
（二）PCR 程序设置（标准 35 循环）
预变性：94℃，3-5min（彻底变性模板 DNA）。
循环阶段（35 次）：
变性：94℃，30s（双链解链）。
退火：55-65℃，30s（引物结合模板，按引物 Tm 值调整）。
延伸：72℃，1min/kb（Taq 酶合成新链，1kb 片段约 1min）。
终延伸：72℃，5-10min（确保片段完整延伸）。
保温：4℃，∞（防止非特异性复性，短期保存）。
（三）产物检测（琼脂糖凝胶电泳）
制胶：1% 琼脂糖凝胶（1g 琼脂糖 + 100mL 1×TAE 缓冲液），加热融化后加核酸染料，倒胶插梳，凝固 30min。
上样：取 5μL PCR 产物 + 1μL 上样缓冲液，点样；同时加 DNA Marker（分子量对照）。
电泳：120V，20-30min，至溴酚蓝迁移至凝胶 2/3 处。
成像：凝胶成像系统观察条带，目标片段位置与预期一致则为阳性。
四、参数优化
退火温度（Tm）：引物 Tm 值 = 4×(G+C)+2×(A+T)，退火温度一般低于 Tm 值 5℃，温度过高无条带，过低非特异性条带多。
Mg²⁺浓度：1.5-2.5mM，浓度过低酶活性低、产量少；过高非特异性扩增增加。
循环数：25-35 个循环，少于 25 个产物不足，多于 35 个易出现非特异性条带。
延伸时间：按目标片段长度调整，≤1kb 用 1min，1-3kb 用 2-3min。
注意事项：
试剂禁止反复冻融，分装为小体积 - 20℃保存，融化后冰上放置不超过 2 h
所有耗材必须无 DNase/RNase，吸头一次性使用，废液、废弃 PCR 管 121℃高压灭菌后丢弃
阳性质粒高拷贝，开盖全程在生物安全柜操作，防止气溶胶污染实验室
试剂盒仅限科研检测，禁止人、临床样本检测
试剂盒过期、试剂浑浊、变色禁止使用
若大量样本出现阴性对照带污染，立即更换全新试剂盒，彻底紫外消毒实验台面、移液器
公司正在出售的产品：
驴特定基因序列PCR检测试剂盒 | 产气克雷伯氏菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 羰基化蛋白检测试剂盒 PC ELISA Kit |
绿豆内源基因PCR检测试剂盒 | 汉坦病毒1型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 乳头状瘤病毒16型毒衣壳蛋白L1检测试剂盒 IgG ELISA Kit |
马鼻肺炎病毒PCR检测试剂盒 | 登革病毒PCR检测试剂盒（荧光PCR法） | 生长激素释放肽检测试剂盒 Ghrelin ELISA Kit |
马媾疫锥虫PCR检测试剂盒 | 鸭肝炎病毒2型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 肽-主要组织相容性复合体复合物检测试剂盒 pMHC ELISA Kit |
猫弓形虫PCR检测试剂盒 | 兔粘液瘤病毒染料法荧光定量PCR试剂盒 | 铁-过氧化物岐化酶检测试剂盒 Fe-SOD ELISA Kit |
马疱疹病毒4型（EHV-IV）核酸检测试剂盒 | 木贼镰刀菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 髓鞘蛋白P0检测试剂盒 MPZ ELISA Kit |
马生殖泰勒氏菌PCR检测试剂盒 | 腺病毒B型染料法荧光定量PCR试剂盒 | 猪圆环病毒/伪狂犬病毒(PCV/PRV)核酸检测试剂盒糖类抗原72-4检测试剂盒 CA72-4 ELISA Kit |
马腺疫链球菌PCR检测试剂盒 | 隐袭腐霉染料法荧光定量PCR试剂盒 | 水通道蛋白2检测试剂盒 AQP2 ELISA Kit |
马轮状病毒PCR检测试剂盒 | 溶血梭状芽孢杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 水通道蛋白4检测试剂盒 AQP4 ELISA Kit |
关键字： 猪圆环病毒/伪狂犬病毒;PCV/PRV;核酸检测试剂盒;
上海研生实业有限公司成立于2011年专业销售各种科学实验产品，包括分子生物学、细胞生物学、免疫学、等多个研究及应用领域。旗下有“上研生"品牌。
我们努力将欧美进口品牌的产品推荐给各类研究人员；另一方面也非常重视国内科研市场的产品开发，推出了一系列具有竞争力的产品和服务。
同时国家对于生物行业的发展给予极大的重视，更多地侧重于科研的投入。公司的服务和业务在同行获得认可。也具备丰富的管理经验，同时我们建立了集技术支持、售后服务等多方位的服务体系。我们有激情、有理想，更有责任感，是您科研道路上值得信赖的伙伴。
公司的理念是：以诚信为本，努力打造优质品牌，为您提供产品的售中、售后服务。