产品名称:鼻疽伯克霍尔德菌(BM)核酸检测试剂盒
英文名称:Burkholderia Mallei (BM) Nucleic Acid Detection Kit
货号:YS-P015444
分类:核酸检测试剂盒
规格:50T/盒
检测原理:
bimA 毒力基因特异性荧光 PCR,靶向鼻疽菌毒力决定基因,区分类鼻疽伯克霍尔德菌,精准检测马属动物鼻疽病原。
巢式 PCR 富集低载量靶 DNA,皮肤溃疡、鼻腔分泌物样本病菌载量低,两轮扩增提升检出灵敏度。
核酸膜杂交显色检测,扩增产物与 bimA 特异性探针结合显色,基层无 PCR 设备实验室可使用。
实验流程:
样本制备:
使用CTAB法或商业DNA提取试剂盒从组织中提取基因组DNA。
建议DNA浓度≥20 ng/μL,A260/A280比值1.8~2.0。
反应体系配制(20 μL体系示例):
预混PCR Master Mix(含染料、dNTPs、Taq酶等)
特异性引物混合液
模板DNA(2~5 μL)
补充无核酸酶水至终体积。
PCR扩增程序:
预变性:95℃ 5分钟;
循环阶段(40~45 cycles):95℃ 10秒 → 60℃ 30秒(采集荧光信号);
熔解曲线分析:60~95℃(可选,用于验证扩增特异性)。
结果判读:
阳性:Ct值≤35且熔解曲线峰单一;
阴性:Ct值≥40或无扩增曲线;
可疑:35<Ct值<40,建议复测或结合熔解曲线分析。
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注意事项:
1、实验分区管理
实验全程需严格划分三个独立区域:试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区,各区实验服、移液器及耗材严禁混用,防止交叉污染。
2、防止污染操作
使用带滤芯枪头,每步更换枪头;
阳性对照操作应在专用生物安全柜中进行,避免污染其他试剂;
加样后立即盖紧管盖,避免气溶胶扩散。
3、试剂保存与使用
所有试剂需-20℃避光保存,避免反复冻融,确保稳定性;
使用前于冰上解冻并轻柔混匀,瞬时离心后使用。
关键字: 鼻疽伯克霍尔德菌;BM;核酸检测试剂盒;
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